王芳
- 作品数：15 被引量：39H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划黑龙江省博士后基金公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 禽传染性支气管炎病毒单克隆抗体的制备及其B细胞抗原表位的鉴定被引量：7
- 2012年
- 为鉴定传染性支气管炎病毒(IBV)的抗原表位,本研究将IBV ck/CH/LDL/091022株免疫6周龄～8周龄BALB/c小鼠,将小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,经过有限稀释法克隆筛选,得到一株针对IBV核衣壳(N)蛋白的单克隆抗体(MAb)2F2,经鉴定其染色体数目为101条,MAb亚类鉴定其重链属于IgG1,轻链属于к链。用肽扫描方法将IBV ck/CH/LDL/091022株N基因截短为具有相互部分重叠的23段,表达带GST标签的重组蛋白,与MAb 2F2进行western blot和ELISA反应后,鉴定其表位为397INWGDSAL404。将表位序列进行Blast结果表明,本研究鉴定的表位在大部分IBV株中均为保守抗原表位,为进一步建立IBV的检测方法奠定了基础。
- 王芳刘晓丽赵飞韩宗玺邵昱昊孔宪刚刘胜旺
- 关键词：传染性支气管炎病毒单克隆抗体表位
- 表达小反刍兽疫病毒F基因重组腺病毒的构建及对小鼠的免疫原性被引量：4
- 2011年
- 为构建表达小反刍兽疫病毒(PPRV)F蛋白的重组腺病毒,本实验合成密码子优化的PPRVF基因,将其克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,并以PmeⅠ线性化后转化含有人5型腺病毒骨架的BJ5183感受态细胞,通过细菌内同源重组构建表达PPRVF蛋白的重组腺病毒质粒pAdV-F,经PacⅠ线性化后转染AD-293细胞,获得重组腺病毒rHAdV-F。经PCR和Dot-ELISA鉴定,F蛋白在AD-293细胞中获得表达。该重组腺病毒与野生型腺病毒复制能力相近,但病毒滴度略低。间接ELISA方法检测显示rHAdV-F可以诱导小鼠产生抗PPRV特异性体液免疫应答。
- 王芳王芳周国辉曹丽艳李一经
- 关键词：小反刍兽疫F基因免疫原性
- 两种阿卡斑病毒抗体ELISA检测方法的建立与初步应用被引量：2
- 2014年
- 为建立阿卡斑病ELISA血清学诊断方法,本研究利用原核表达的阿卡斑病毒(AKAV)核衣壳(N)蛋白和全病毒作为包被抗原,分别建立两种AKAV抗体的间接ELISA检测方法,并对其反应条件进行优化。应用两种间接ELISA检测方法分别对不同省份来源的247份牛血清样本进行检测,与中和试验结果进行比较。结果表明,中和试验抗体检出阳性率为29.55%,N蛋白间接ELISA(N-ELISA)和AKAV全病毒间接ELISA(AKAV-ELISA)与中和试验的符合率分别为72.5%和76.5%。本研究建立的N-ELISA及AKAV-ELISA方法均可以用于AKAV感染的流行病学调查。其中,N-ELISA方法安全性好,更适合推广应用。
- 刘晓婧王芳赵权于力
- 关键词：间接ELISA
- 山羊痘病毒疫苗株ORF64—ORF67的分子特征被引量：7
- 2007年
- 为构建胸苷激酶(Thymidine kinase,TK)基因缺失活载体疫苗,对山羊痘病毒(Goatpox virus,GPV)疫苗株(AV41)ORF64～ORF67进行了克隆和序列分析。结果表明:在全长3460bp的DNA序列中,包含4个完整的开放阅读框(Open reading frame,ORF)。ORF64核苷酸序列全长396bp,编码病毒膜蛋白;ORF65核苷酸序列全长444bp,ORF64和ORF65有44个碱基重叠。ORF66核苷酸序列全长534bp,编码胸苷激酶,具有保守的ATP结合位点和细胞中TK特征序列。ORF67核苷酸序列全长594bp,编码宿主范围相关蛋白。ORF64～ORF66在脊索动物痘病毒亚科中是完全保守的。与参考的国外GPV进行序列比较,ORF64～ORF67有一些差异,如突变和插入等。同源性分析显示:与羊痘病毒属比较,核苷酸和氨基酸同源性均较高(94.7%～100%)。我国的GPV不同毒株TK同源性为100%。与脊索动物痘病毒亚科中其他成员同源性差异较大(17.3%～65.2%)。将GPV AV41 TK与鸡、小鼠和人类的TK氨基酸序列进行比较,分析GPV AV41 TK进化关系表明,GPVTK基因在进化上可能起源于宿主细胞的TK1基因。本研究结果显示,在分子水平上我国GPV AV41与国外毒株存在差异,推测可能是GPV AV41疫苗株在致弱过程中发生一定程度的变异。
- 王芳陈洪岩刘胜旺
- 关键词：山羊痘病毒胸苷激酶分子特征
- 虫媒病毒与牛羊繁殖障碍性疾病被引量：2
- 2016年
- 牛羊传染性疾病,在我国习惯上划分为烈性传染病口蹄疫、羊的小反刍兽疫及羊痘、人畜共患病布鲁氏杆菌病和牛结核以及多系统性传染病,后者包括以呼吸道疾病综合症为特征的呼吸系统疾病、以腹泻为特征的消化系统疾病和以流产为特征的繁殖障碍性疾病。繁殖障碍性疾病（Reproductive disorders diseases）即感染生殖系统的疾病,
- 王芳齐瑛琳于力
- 关键词：繁殖障碍性疾病虫媒病毒烈性传染病小反刍兽疫牛结核布鲁氏杆菌病
- Asia 1型口蹄疫病毒空衣壳在毕赤酵母中的表达及免疫原性分析
- 口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)是偶蹄动物的烈性传染病,严重危害畜牧业的发展。传统的病毒灭活疫苗预防口蹄疫虽然有效,但存在病毒从工厂逃逸以及灭活不彻底的,安全性隐患。因此,研制安全、有效、而...
- 王芳王海伟于力
- 文献传递
- 山羊痘基因工程标记疫苗的初步研究被引量：4
- 2007年
- 为了有效地预防和根除山羊痘,研制能够区分自然感染和疫苗免疫的标记疫苗。本研究在山羊痘病毒(goat pox virus,GPV)疫苗株AV41胸苷激酶(thymidine kinase,TK)基因克隆、鉴定的基础上,构建转移载体。将痘苗病毒(Vaccinia Virus,VV)晚期启动子P11和大肠杆菌β-半乳糖苷酶基因(LacZ)报告基因片段插入含有TK片段同源臂的载体pTK的KpnI酶切位点,经酶切、PCR鉴定出,命名为pTK-LacZ。用脂质体法转染感染了GPVAV41株的犊牛睾丸(bovine testes,BT)细胞,待出现80%以上的细胞病变时收获病毒,经过连续9代蓝色蚀斑筛选、纯化和PCR鉴定,获得纯化的表达LacZ基因、TK功能缺失的重组病毒,命名为rGPV-LacZ。生物学特性研究显示,LacZ基因的插入不影响重组病毒的增殖特性,其毒力、生长特性与亲本株相似,保持原有疫苗株的生长特性,而且在BT细胞和羔羊睾丸(lamb testes,LT)细胞连续传20代遗传性状很稳定。本研究筛选、纯化的重组病毒rGPV-LacZ可以区分自然感染和疫苗免疫动物,为进一步研制山羊痘病毒基因工程标记疫苗奠定了基础。
- 王芳刘胜旺邵昱昊陈洪岩
- 关键词：重组山羊痘病毒标记疫苗
- 山羊痘病毒p32基因原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立被引量：9
- 2009年
- 为了建立山羊痘病毒(GPV)抗体快速检测方法,本研究通过人工合成密码子优化的GPVp32基因,并在大肠杆菌中进行截短表达(p32-opti)。表达的重组p32-opti蛋白主要以包涵体形式存在,Western blot分析表明,p32-opti与GPV标准阳性血清具有良好的抗原性。以纯化的重组p32-opti蛋白作为ELISA包被抗原,建立间接ELISA抗体检测方法。该方法检测小反刍兽疫、蓝舌病和口蹄疫阳性血清均无交叉反应;与中和试验(VNT)比较,两者的符合率为95.7%;ELISA批内和批间重复性试验显示,OD值的变异系数小于10%。上述结果表明,该ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。对来自黑龙江、内蒙古和新疆自治区的390份山羊和绵羊血清进行检测,抗体阳性率为80.2%,表明这些地区的山羊和绵羊群普遍存在羊痘病毒抗体。本研究建立的间接ELISA方法可用于GPV感染的流行病学调查以及疫苗接种动物的抗体水平监测。
- 王芳雷震于力
- 关键词：GPVP32基因大肠杆菌表达ELISA
- 表达小反刍兽疫病毒H基因重组腺病毒的构建及对小鼠免疫原性的试验被引量：2
- 2011年
- 人工合成密码子优化的小反刍兽疫病毒(PPRV)H基因,将其克隆到腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,电转化BJ5183感受态细胞,获得重组腺病毒质粒pAdV-H,转染AD-293细胞,获得重组腺病毒rHAdV-H。用PCR和Dot-ELISA鉴定H基因在AD-293细胞中的表达,同时用一步生长曲线,测定该重组腺病毒的复制能力。接种小鼠评价免疫效力,用间接ELISA试验检测抗体水平,结果表明,PPRV H基因在AD-293细胞中获得了表达,子代重组腺病毒在感染细胞后60 h滴度最高,为3×108PFU/mL。rHAdV-H免疫小鼠产生针对PPRV特异性抗体,表明该重组腺病毒可以诱导抗PPRV的特异性免疫应答。
- 王芳王芳周国辉曹丽艳李一经
- 关键词：小反刍兽疫H基因免疫原性
- 共表达口蹄疫病毒vp1基因和山羊IFN-γ基因的重组山羊痘病毒的构建被引量：2
- 2008年
- 将山羊IFN-γ基因插入到含有口蹄疫病毒(FMDV)vp1基因的山羊痘病毒(GPV)转移载体PTK-vp1中,获得含有FMDVvp1基因和山羊IFN-γ基因的重组转移载体pTK-vp-IFNγ,以本实验室构建的表达β-半乳糖苷酶基因(LacZ)的山羊痘重组病毒rAV41-LacZ为亲本毒,与转移载体pTK-vp-IFNγ共同转染犊牛睾丸细胞进行同源重组,通过7轮反向蓝白斑筛选,产生重组山羊痘病毒rAV41-VP-IFNγ,通过PCR和间接免疫荧光实验证实获得了能够稳定表达FMDVvp1和山羊IFN-γ的重组山羊痘病毒。
- 海岗韩宗玺邵昱昊王芳陈洪岩刘胜旺
- 关键词：重组山羊痘病毒Β-半乳糖苷酶基因
