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冠状病毒的反向遗传学研究进展: 2024年; 冠状病毒是一种能够感染多种动物和人快速进化的病原体,可引起轻度至重度呼吸道感染,在全球范围内广泛流行,尤其是2019年爆发了前所未有的SARS-CoV-2疫情,给社会造成了严重的公共卫生危机和重大的经济损失,迫切需要人们加深对冠状病毒生物学的了解。反向遗传学是研究病毒基因组结构和功能的强大平台,已经广泛应用于病毒的复制和致病机理研究、蛋白功能表征、减毒疫苗研发和抗病毒治疗药物的筛选等方面。本文概述了冠状病毒和冠状病毒反向遗传系统的进展并进行展望,期望为进一步开展冠状病毒致病与防治等基础研究及冠状病毒载体构建、新型疫苗研制等应用研究提供新见解。; 刘强牛小霞陈吉祥加华才让高辉方敏刘艳玲张思浓李勇; 关键词：冠状病毒反向遗传学感染性克隆病毒拯救

The Construction and Identification of Eukaryotic Expression Vector pEGFP-N1-hTERT被引量：5: 2008年; [Objective] The aim of this study is to construct eukaryotic expression vector pEGFP-N1-hTERT and observe its expression in eukaryotic cells.[Method]The eukaryotic expression vector pEGFP-N1-hTERT was constructed with pC1-neo-hTERT and pEGFP-N1 plasmids,and the accuracy of human telomerase reverse transcriptase(hTERT)gene fragment was confirmed by double enzyme digestion and DNA sequencing analysis.After transfecting pEGFP-N1-hTERT into rat fetal neural stem cells(NSCs),the protein localization of human telomerase reverse transcriptase were indirectly observed through green fluorescent protein in the cells,and the correctness of constructed pEGFP-N1-hTERT was certificated by RT-PCR and Western Blot analysis.[Result]The eukaryotic expression vector pEGFP-N1-hTERT had correct structure and could express in eukaryotic cells.[Conclusion]This study laid a foundation for the establishment of immortalized NSCs line in rats.; 李勇李勇李军李军; 关键词：GFP HTERT EUKARYOTIC VECTOR CONSTRUCTION IDENTIFICATION

结核分枝杆菌PE/PPE蛋白家族生物学研究进展被引量：4: 2021年; 结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)是引起结核病的病原体,也是单一感染微生物导致死亡的最重要原因。在MTB基因组上有一类特殊的蛋白家族——PE/PPE蛋白家族,该蛋白家族对细菌毒力、抗原变异、宿主细胞命运等至关重要,且在特异性诊断试剂和疫苗研制中具有广阔的应用前景。本文将从PE/PPE蛋白家族的结构特征、生物学功能、及其对宿主免疫反应调控等方面的近年来研究进展作一综述。; 王璞蔡玉荣张刚孔云逸穆爱娟李勇; 关键词：结核分枝杆菌 TH1 巨噬细胞

中国2012—2022年羊群中蓝舌病毒流行的Meta分析: 2024年; 旨在系统评价和分析我国2012—2022年羊群中蓝舌病毒(bluetongue virus,BTV)感染状况,为我国羊群BTV防控提供理论依据。通过检索2012—2022年中国知网(CNKI)、万方、维普、PubMed和ScienceDirect 5个数据库中对中国羊群BTV流行情况研究的文献并进行Meta分析。检索并筛选后共纳入Meta分析的有28篇文献,涉及样本总数为38226头羊,其中9109头羊为BTV阳性。分析显示,我国羊群中BTV的整体流行率为23.8%(95%CI:23.4,24.3),其中绵羊流行率为29.4%(95%CI:14.7,44.1),山羊流行率为25.1%(95%CI:18.6,31.7)。我国各省/市间比较发现,重庆市流行率最高,为34.6%(95%CI:32.0,37.1),其次为云南省和内蒙古自治区。亚组分析发现,我国5大区域BTV流行率存在显著地区差异(P=0.011),中国东部、南部、西部、北部及中部地区流行率分别为6.1%(95%CI:4.3,7.9)、33.8%(95%CI:29.5,38.1)、21.7%(95%CI:17.1,26.2)、21.0%(95%CI:8.3,33.6)及26.6%(95%CI:24.3,28.8)。同时,检测方式和气候类型也是我国羊群中BTV流行的风险因子(P<0.05)。上述分析结果提示,我国羊群中BTV流行率较高并且分布广泛,有必要持续对我国BTV的感染状况进行监测并采取适当的预防措施。; 高辉方敏姜玲玲马耀玉刘强张刚牛小霞王璞李勇张思浓; 关键词：蓝舌病毒蓝舌病流行率 META分析

猪肺脏气道上皮干细胞的特异抗体筛选与抗原表达研究: 2013年; 猪肺脏气道上皮主要由基底细胞,克拉拉细胞,纤毛细胞,杯状细胞等上皮细胞类型组成,筛选猪气道上皮干细胞的相关特异性抗体,观察其特异抗原的表达,将有助于对猪气道上皮干细胞的分离、鉴定和生物学特性的研究。试验中,制备远端气道上皮细胞的冰冻切片与细胞爬片,利用免疫荧光染色法,分析不同物种来源的抗体对猪气道上皮细胞的免疫染色反应;同时利用Oct3/4、Sox2、CD133和SSEA-1等10种上皮干细胞相关抗体分析猪气道上皮干细胞表面抗原表达情况。通过试验,筛选出在猪气道上皮干细胞相关抗体,并发现气道组织冰冻切片未检测到这10种抗体相关的阳性细胞,而在细胞爬片中观察到CD49f和CD117阳性细胞数量较多。免疫荧光共染发现这些CD49f和CD117阳性细胞同时也表达基底细胞表面标记Keratin 14。这可能是正常情况下猪气道上皮干细胞数量极为稀少,表面抗原表达量低而不易检测到,在肺脏气道上皮受到外环境刺激时(如消化),上皮干细胞开始增殖以完成损伤修复作用发生数量上的增殖。综上所述,利用Keratin 14和CD49f或CD117(c-kit)双标染色法可以鉴定猪肺脏气道上皮干细胞的候选亚群来用于其生物学特性与功能的研究。; 杨佳丽石娟马凌洁包少文郝秀静曾瑾李勇刘晓明; 关键词：干细胞

滩羊胎儿成纤维细胞系的建立及其生物学特性研究被引量：4: 2014年; 【目的】以滩羊胎儿皮肤组织为材料,获得符合体细胞克隆转基因基本要求的供体细胞系。【方法】取滩羊胎儿皮肤组织,采用组织块法分离培养获得滩羊胎儿成纤维细胞,观测其形态和生长情况,鉴定其性别,并对其染色体核型和红色荧光报告基因质粒(pmCherry-N1)转染等生物学特性进行研究。【结果】采用组织块法成功获得了滩羊胎儿成纤维细胞,其细胞群体倍增时间(PDT)约为48h;5代、15代、25代滩羊胎儿成纤维细胞核型分析表明,各代细胞染色体均为2n=54,未见异常;滩羊胎儿成纤维细胞的转染效率较高,约为50%,对最终获得的稳定表达红色荧光蛋白的胎儿成纤维细胞进行核型分析,结果证明遗传物质没有发生变化。【结论】建立了滩羊胎儿成纤维细胞系,为滩羊分子育种奠定了基础。; 王娟孙毅程龙宋孚阳李敏刘晓明李勇; 关键词：滩羊成纤维细胞生物学特性体外培养

Hedgehog、p53和NF-κB信号通路在病原微生物入侵机体时的免疫应答机制被引量：5: 2016年; 病毒、细菌等致病病原微生物一旦入侵机体,免疫系统会迅速启动抗感染免疫应答反应,但长期困扰免疫学界的问题是免疫系统通过什么样的细胞与分子机制特异性感知外源病原微生物入侵,并有效地启动免疫应答效应以杀伤、清除病原微生物,以及能否准确预测外源病原体入侵时机体做出的应答。; 任奇杰程龙丁向真杨易周学章刘晓明李勇; 关键词：免疫应答 P53 HEDGEHOG NF-ΚB

miR-146a在肺泡Ⅱ型上皮细胞抗结核分枝杆菌感染中的免疫调控作用被引量：4: 2019年; 利用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)的方法分析了强毒株人型结核分枝杆菌H37Rv和减毒株卡介苗(BCG)感染肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)株A549中微小RNA-146a (miR-146a)的表达情况;构建miR-146a腺病毒过表达载体,分析在结核分枝杆菌(Mtb)感染A549细胞中,过表达miR-146a对toll样受体(TLRs)信号通路及炎症因子的表达调控作用.结果表明, Mtb感染可引起A549细胞中miR-146a表达上调;当在A549细胞中过表达miR-146a时,在BCG感染组中TLR2的表达表现为感染后显著抑制, H37Rv感染组中TLR2表达差异不显著;TLR4在BCG和H37Rv感染组中均表现为显著下调.过表达miR-146a时,在BCG和H37Rv感染组中对TLR信号通路的下游分子髓样分化因子(MyD88)、TNF受体关联因子6 (TRAF6)、核因子κB (NF-κB)和促炎细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6的表达均表现为感染后的抑制作用,而IL-8表达影响不明显.说明在AECⅡ细胞抗Mtb感染过程中, miR-146a负调控TLRs信号通路中MyD88、TRAF6、NF-κB和IL-6等来调控AECⅡ细胞对Mtb的感染过程.; 程龙王晓平王媛曾瑾刘晓明李勇; 关键词：MIR-146A 免疫调控

牛肺泡巨噬细胞微小RNA的克隆与鉴定: MicroRNA是一类长约22个核苷酸的内源性非编码单链小分子RNA,可调节与其序列互补的mRNA的表达,普遍存在于高等生物界,在不同物种间具有高度的保守性,其表达具有高度组织特异性、保守性和时序性,能通过与靶基因mRN...; 徐广贤王玉炯李勇李敏张艳李娟贾浩; 文献传递

产气荚膜梭菌TaqMan实时荧光定量PCR特异性引物设计和方法验证: 2024年; 目的建立针对水样中产气荚膜梭菌检测的TaqMan实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)方法,并测试该方法在自来水样中的检测效果。方法选择位于该菌拟核中高度保守的plc基因,设计特异性引物和TaqMan探针,经优化后建立了针对该菌的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,结合滤膜法处理含有plc基因的标准菌株的模拟污染水样,并对所建立的方法进行测试。结果所建立的产气荚膜梭菌TaqMan实时荧光定量PCR检测方法具有高度的特异性,13株食源性致病菌、3株艰难梭菌及1株腐败梭菌的Ct值大于40;该方法的最低检出限为1×10 copies/μL,具有较高的灵敏性;对模拟污染水样的最低检测限为1.0×10^(2)CFU/mL。应用该方法对4份人工模拟污染阳性水样与90份自来水样进行检测发现,2份1.0×10^(2)CFU/mL的模拟污染水样可检出产气荚膜梭菌,2份1.0×10 CFU/mL的模拟污染水样与90份自来水样均未检出产气荚膜梭菌。结论所建立的产气荚膜梭菌TaqMan实时荧光定量PCR检测方法具有特异性好、灵敏性高的优点,对水体中产气荚膜梭菌的检测具有较高的应用价值。; 马嘉琦孙波孙波王东赵志军王东曾瑾; 关键词：产气荚膜梭菌实时荧光定量PCR 食源性致病菌

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李勇

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