目的探讨长期甲醛固定的大鼠视网膜胰蛋白酶消化的最佳消化时间和最佳胰蛋白酶浓度。方法健康♂ SD大鼠,颈椎脱臼处死,摘取眼球,放入4%甲醛固定液,固定时间为2 d、2周、4周、3月、5月、7月。分离固定不同时间的视网膜,放入3%、6%、9%胰蛋白酶消化,37℃恒温箱孵育。分别记录固定不同时间的视网膜在3%、6%、9%胰蛋白酶中消化完全所需时间。铺片操作,行 PAS 染色。显微镜下记录视网膜消化情况。结果新鲜眼球常规固定48 h,3%胰蛋白酶37℃消化3.5 h,视网膜消化完全。对于甲醛固定2周及1月的大鼠眼球,采用常规胰蛋白酶浓度(3%),仅延长胰蛋白酶的消化时间至9 h 及14 h,可以达到常规固定组织的消化效果。对于固定3月的大鼠眼球,采用常规浓度的胰蛋白酶仅延长消化时间至22 h,同样可以得到完整的视网膜血管铺片,且提高胰蛋白酶浓度对于缩短视网膜消化时间的影响不大。而对于固定5~7月的大鼠眼球,6%和9%浓度的胰蛋白酶可以在一定程度上缩短视网膜消化的时间至22 h 和28 h,有利于得到相对完整的视网膜血管。结论固定时间短于3月的眼球组织,采用3%胰蛋白酶消化,延长消化时间可达到最佳消化效果。对于固定5~7月的视网膜组织,不仅需要延长消化时间,还需要通过提高胰蛋白酶浓度至6%,才可以获得最佳消化效果的视网膜血管。
目的:建立基于单粒子光学传感技术的光阻法(LE/SPOS法),对脂肪乳静脉注射液中乳滴粒径大于5μm的尾部大粒子进行准确控制。方法:采用EXT模式(1.8-50μm),稀释流速60 m L·min-1,目标粒子数2000个·m L^-1,进样量0.98 m L,对仪器校正和检定后,分别对系统适用性、样品测定的精密度和中间精密度、回收率等方法学进行系统考察,并对多批乳剂样品进行检测。结果:5、10、25μm标准粒子测得的粒径大小和颗粒数均在标称值6%以内;不同PFAT5水平的脂肪乳样品测定的RSD≤5%,2台仪器测定的RSD〈10%,低、中、高3个PFAT5水平的5μm标准粒子平均回收率为100.5%,RSD〈2.0%(n=6);8批乳剂样品PFAT5测得值在0.010%-0.066%。结论:建立的光阻法操作简便,符合方法学考察要求,能够对脂肪乳静脉注射液中的PFAT5进行准确定量。