邓向东
- 作品数：9 被引量：16H指数：2
- 供职机构：中国人民解放军第九七医院更多>>
- 发文基金：南京军区医学科学技术研究计划课题国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 壳聚糖-肠三叶因子纳米粒制备与体外转染的实验研究
- 2014年
- 目的:构建hITF基因传递系统,检测其细胞转染效果。方法:首先构建肠三叶因子(intestinal trefoil factor,ITF)的真核表达载体,再利用复凝法制备壳聚糖纳米粒,用透射电镜观察纳米粒的形态及大小,并利用HEK293细胞检验纳米粒的转染能力,最后利用RT-PCR和Western blot检测目的基因的转录及表达情况。结果:成功构建出hITF真核表达载体,利用复凝法制备了不同N/P比的壳聚糖纳米粒,透射电镜观察到粒度<1 000 nm,粒径呈窄分布;荧光显微镜及流式细胞仪检测显示,壳聚糖纳米粒对HEK293细胞的转染率约为80%,和脂质体的转染率基本一致;RT-PCR和Western blot检测说明hITF被成功转录并分泌表达。结论:成功构建了hITF理想的基因传递系统,为壳聚糖介导hITF基因治疗的应用打下基础。
- 孙勇王良喜孙曙光毛学飞邓向东潘晓峰张方陈宝君勒娟
- 关键词：壳聚糖基因治疗转染
- 基因重组hTFF3治疗烧伤小鼠肠黏膜损伤的实验研究
- 目的：观察基因重组hTFF3对严重烧伤所致肠黏膜损害的治疗作用.方法：采用30％体表面积Ⅲ度烧伤大鼠模型,随机分成对照(C)组、烧伤对照(B)组和烧伤后hTFF3治疗(TFF3)组,TFF3组伤后1小时开始灌胃hTFF3...
- 孙勇王良喜毛学飞邓向东潘晓峰吴杭庆张方
- 关键词：三叶因子3烧伤肠黏膜
- 睑袋整复术联合外眦皮瓣骨膜固定临床效果观察
- 下睑下垂是人体开始老化的特征之一.下睑老化的过程可以归纳为皮肤的移位、眼轮匝肌的肥大、眶隔的薄弱和由此导致的眶隔脂肪的疝出,呈袋状畸形,形成睑袋.经皮肤入路的睑袋整复术仍是临床上用以去除眶隔脂肪及松弛下垂皮肤最为直接的手...
- 徐梦琼孙勇王良喜毛学飞邓向东
- 人三叶因子3基因启动子区的生物信息学分析被引量：8
- 2013年
- 目的人三叶因子3(human trefoil factor 3,hTFT3)是一种具有胃肠黏膜修复和保护作用的小分子多肽,文中利用生物信息学在线软件预测hTFF3基因启动子功能。方法获取hTFF3基因启动子全长序列,利用多种在线相关软件预测出CpG岛及转录因子结合部位。结果 hTFF3基因序列全长为2295 bp,核苷酸数据库(GenBank)登录号为AB038162.1。hTFF3启动子存在于非编码区上游1500bp内,启动子序列中未发现CpG岛,启动子区共发现204个转录因子。结论生物信息学在线软件能预测hTFF3基因启动子功能,提高了针对启动子的研究效率。
- 孙勇王良喜孙曙光王静毛学飞邓向东
- 关键词：启动子生物信息学转录因子
- 基因重组肠三叶因子对肠上皮细胞修复和保护作用的研究被引量：1
- 2014年
- 目的：探讨基因重组肠三叶因子（ITF）对肠上皮细胞（IEC-6）是否具有促进修复和保护的作用。方法：制备不同浓度的重组ITF。首先,采用MTT法观察ITF对IEC-6细胞增殖活性的影响;其次,制作IEC-6细胞机械损伤模型,观察ITF对IEC-6细胞移行速率的影响;最后,采用烧伤血清致IEC-6细胞损伤模型,观察ITF对IEC-6细胞的保护作用。结果：各种浓度的ITF对IEC-6细胞具有一定的促增殖作用,但差异无统计学意义（P=0.19）。ITF可加快IEC-6细胞移行速度,是对照组的2-3倍（P〈0.01）。ITF可明显降低烧伤血清致IEC-6细胞损伤程度,反映细胞损伤的谷草转氨酶（AST）、乳酸脱氢酶（LDH）活性显著下降,且作用持续12 h。联合使用黏蛋白（Mucin）可显著加强ITF的细胞保护作用,谷丙转氨酶（ALT）、AST、LDH活性显著降低,且保护作用延长至48 h（P〈0.01）。结论：ITF可加快细胞移行速度,促进受损肠黏膜屏障的重建,对肠上皮细胞具有明显的保护作用。单独使用ITF对细胞增殖影响不明显,与Mucin联合使用,其保护作用明显增强。
- 王良喜孙曙光毛学飞邓向东潘晓峰张方孙勇
- 关键词：肠三叶因子肠上皮细胞迁移
- 基因重组人三叶因子3治疗烧伤小鼠肠黏膜损伤的实验研究被引量：2
- 2014年
- 目的观察基因重组hTFF3对严重烧伤所致肠黏膜损害的治疗作用。方法采用30%体表面积Ⅲ度烧伤小鼠模型,随机分成对照组、烧伤组和烧伤后hTFF3治疗(TFF3)组,TFF3组伤后1 h开始hTFF3灌胃,剂量为1 mg/kg,烧伤组和对照组灌胃等量生理盐水,各组每天灌胃1次,连续5 d。观察烧伤后肠组织病理学改变,肠黏膜肠绒毛高度、隐窝深度及病死率。结果烧伤小鼠每天给予1 mg/kg的hTFF3灌胃,显著降低肠黏膜受损程度,肠黏膜病理改变明显减轻,烧伤组以出血、坏死和溃疡为主,TFF3组以充血、水肿为主,同时肠黏膜厚度、绒毛高度、隐窝深度明显增加,小鼠5 d病死率有所下降(27.3%vs 45.6%)。结论重组hTFF3对烧伤后肠道损伤具有明显的治疗作用,能促进受损黏膜屏障的重建。
- 孙勇王良喜毛学飞邓向东潘晓峰吴杭庆张方
- 关键词：三叶因子3烧伤肠黏膜小鼠
- 人三叶因子3对烧伤小鼠胃黏膜的保护作用研究被引量：5
- 2013年
- 目的观察基因重组人三叶因子3(hTFF3)对严重烧伤所致胃黏膜损害的保护作用。方法采用30%体表面积Ⅲ°烧伤小鼠作为模型。将小鼠随机分成正常对照(A)组、烧伤对照(B)组和hTFF3治疗(C)组,C组伤后1 h开始灌胃hTFF3,剂量为1 mg/kg,B组灌胃等量生理盐水,各组每天灌胃1次,连续5 d。观察烧伤后胃黏膜损伤指数、胃黏膜大体形态学改变、病理学改变,以及病死率。结果烧伤小鼠每天给予1 mg/kg的hTFF3灌胃,胃肠黏膜受损程度显著降低,胃黏膜病理改变明显减轻,B组以出血、坏死和溃疡为主,C组以充血、水肿为主,小鼠5 d病死率有所下降(27.3%、45.6%)。结论重组hTFF3对烧伤后胃肠道损伤具有明显的治疗作用,能促进受损黏膜屏障的重建。
- 孙勇王良喜毛学飞邓向东潘晓峰吴杭庆张盼张方
- 关键词：三叶因子3烧伤胃黏膜
- 壳聚糖纳米粒作为肠三叶因子基因传递载体的实验研究
- 2014年
- 目的构建理想的人肠三叶因子(human intestinal trefoil factor,hITF)基因传递系统。方法利用复凝法制备载基因壳聚糖纳米粒,用透射电镜观察纳米粒的形态及大小,以Zeta电位仪检测不同N/P比及不同pH对制备的载基因纳米粒Zeta电位的影响,琼脂糖凝胶电泳分析纳米粒对基因的包载能力,高速离心法测定纳米粒的包封率和载药量,分析纳米粒中基因的体外释放过程,最后检测纳米粒在HEK293细胞中的转染效率。结果利用复凝法制备了不同N/P比的壳聚糖纳米粒,透射电镜显示粒径小于1 000 nm,粒径呈窄分布;Zeta电位与N/P比呈正相关,而与pH值呈负相关;凝胶阻滞实验说明壳聚糖在N/P比大于1时可以完全包裹质粒;包封率随着N/P比的增加而增加,载药量则随着N/P比的增加而减小;体外释放实验显示,纳米粒释放速度先快后慢,并且随着N/P比的增加而逐渐减慢;壳聚糖纳米粒对HEK293细胞的转染率超过50%。结论成功构建了理想的hITF基因传递系统,为壳聚糖介导hITF基因治疗的应用打下基础。
- 孙勇王良喜孙曙光毛学飞邓向东潘晓峰张方
- 关键词：壳聚糖基因治疗
- 人肠三叶因子在pET系统中的表达、纯化及生物活性被引量：1
- 2014年
- 目的构建人肠三叶因子(hITF)原核表达载体,表达重组hITF,并考察其生物学活性。方法通过RT-PCR获得hITF cDNA片段,将目的基因插入原核表达载体pET32a,得到重组载体pET32a-hITF,优化表达条件获得最大表达产量,Ni-NTA亲和层析一步法纯化重组蛋白,SDS-PAGE、Western blotting及N端测序鉴定重组蛋白,细胞重建模型验证其功能。结果经PCR及测序证实,hITF cDNA准确插入原核表达载体pET32a中,诱导表达后,SDS-PAGE分析证明hITF的分子量约为32kD,Western blotting分析表明,表达蛋白具有良好的抗原性和特异性;N端15个氨基酸测序证明其序列正确性;体外实验证实其具有细胞促迁移能力。结论成功构建出原核表达载体pET32a-hITF,获得重组hITF。
- 孙勇王良喜孙曙光毛学飞邓向东潘晓峰张方
- 关键词：大肠杆菌
