李磊
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：郑州大学基础医学院更多>>
- 发文基金：河南省医学科技攻关计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- CXCR4拮抗剂AMD3100通过增强抑制性神经传递减弱大鼠痫性活动被引量：1
- 2022年
- 目的探讨CXCR4特异性拮抗剂AMD3100影响癫痫发作的分子机制。方法(1)动物实验:36只成年雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、癫痫组和AMD3100处理组,每组12只。癫痫组大鼠腹腔注射戊四氮(PTZ)构建癫痫模型,剂量为40 mg/kg;AMD3100处理组大鼠侧脑室注射5μL(5 mg/mL)AMD310020 min后腹腔注射同等剂量PTZ;对照组大鼠腹腔注射等量生理盐水。采用Racine分级评估各组大鼠癫痫发作等级并记录其癫痫发作潜伏期,采用脑电图(EEG)记录各组大鼠脑神经元异常放电情况,采用ELISA试剂盒检测各组大鼠海马组织γ-氨基丁酸(GABA)含量。应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测各组大鼠海马组织神经元γ-氨基丁酸A受体α1亚单位(GABA_(A)Rα1)mRNA水平。(2)细胞实验:另取SD大鼠鼠婴(1日龄)培养原代海马神经元,培养7 d后将细胞分为对照组、癫痫组和AMD3100处理组。癫痫组神经元采用无镁外液诱导的方法构建癫痫细胞模型;AMD3100处理组神经元在含有10 nmol/L AMD3100的无镁外液中培养3 h,随后换为Neurobasal继续培养;对照组采用Neurobasal培养基常规培养。采用全细胞膜片钳技术检测各组神经元灌流AMD3100(10 nmol/L)后自发性抑制性突触后电流(sIPSC)。结果(1)动物实验:AMD3100处理组大鼠发作潜伏期较癫痫组大鼠明显缩短[分别为(663.30±74.84)s、(164.40±17.20)s],差异有统计学意义(t=6.490,P<0.001);AMD3100处理组大鼠4级以上发作次数较癫痫组大鼠明显减少[分别为(3.75±0.39)次、(9.00±0.73)次],差异有统计学意义(t=4.680,P<0.001)。ELISA实验结果显示,3组大鼠GABA含量差异有统计学意义(F=17.850,P<0.001),其中癫痫组明显低于对照组,AMD3100处理组大鼠明显高于癫痫组,差异均有统计学意义(P<0.05)。qRT-PCR实验结果显示,3组大鼠GABA_(A)Rα1 mRNA含量差异有统计学意义(F=14.400,P<0.001),其中癫痫组明显低于对照组,AMD3100处理组大鼠明显高于癫痫组,差异均
- 张玉松陈志国杨子善李磊
- 关键词：Γ-氨基丁酸AMD3100
- miRNA-182对细胞内钠离子通道蛋白Nav1.7表达的影响被引量：1
- 2017年
- 目的:探索miRNA-182对细胞中电压门控钠离子通道1.7(Nav1.7)表达的影响及可能机制。方法:构建重组SCN9A 3'UTR双荧光素酶报告基因载体并与miRNA-182抑制物、类似物或scramble共转染HEK293细胞,通过荧光素酶活性检测观察miRNA-182和SCN9A表达的变化。用谷氨酸钠刺激PC12细胞并转染miRNA-182类似物或抑制物,利用原位杂交、免疫荧光共检测以及蛋白免疫印迹方法检测细胞中miRNA-182和Nav1.7蛋白的表达。结果:miRNA-182能抑制SCN9A 3'UTR在HEK293细胞中的表达。Nav1.7和miRNA-182在PC12细胞共表达。谷氨酸钠可使PC12细胞中Nav1.7表达增高,miRNA-182的表达降低(P<0.05);miRNA-182类似物能拮抗谷氨酸钠的刺激作用。结论:miRNA-182可负调控细胞内Nav1.7蛋白的表达。
- 李鸣蔡伟华邵金平王剑南苏松雪李磊曹靖臧卫东
- 抑制Nav1.6表达对奥沙利铂诱导的大鼠神经病理性疼痛的影响被引量：1
- 2023年
- 目的:探讨抑制Nav1.6表达对奥沙利铂诱导的神经病理性疼痛的影响。方法:①PC12细胞分3组,分别加入终浓度为0.00、0.02和0.05μmol/L的奥沙利铂,采用Western blot法检测各组细胞Nav1.6表达水平。②PC12细胞分为对照组、奥沙利铂组、SCN8A-siRNA-1组、SCN8A-siRNA-2组、SCN8A-siRNA-3组。对照组是正常培养的PC12细胞,奥沙利铂组为含终浓度0.05μmol/L奥沙利铂的PC12细胞,SCN8A-siRNA-1、SCN8A-siRNA-2、SCN8A-siRNA-3组分别为SCN8A-siRNA-1、SCN8A-siRNA-2、SCN8A-siRNA-3转染的含终浓度0.05μmol/L奥沙利铂的PC12细胞。采用Western blot法检测各组细胞Nav1.6的表达水平。运用激光共聚焦显微镜观察荧光染料DiBAC4(3)作用后各组PC12膜电位荧光强度的变化。③SD大鼠24只分为对照组、2 mg/kg奥沙利铂组和4 mg/kg奥沙利铂组,每组8只。奥沙利铂组大鼠分别给予相应浓度奥沙利铂腹腔注射,每2 d注射1次,共6次。检测给药后第0、7、15、21天机械痛缩足阈值及冷痛阈值的变化。④SD大鼠24只分为对照组、奥沙利铂组、SCN8A-siRNA-3组,每组8只。奥沙利铂组给予4 mg/kg奥沙利铂腹腔注射,每2 d注射1次,共6次。SCN8A-siRNA-3组在奥沙利铂注射后第7天背根神经节显微注射SCN8A-siRNA-3。检测第0、3、7、11、15、18、21天机械痛缩足阈值及冷痛阈值的变化。结果:①奥沙利铂增加PC12细胞Nav1.6的表达(P<0.05)。②SCN8A-siRNA转染抑制了奥沙利铂处理的PC12细胞Nav1.6的表达,SCN8A-siRNA-3的抑制效果最好(P<0.05)。抑制Nav1.6的表达后,各组PC12细胞膜电位荧光强度变化均减慢。③奥沙利铂可降低大鼠的机械痛缩足阈值及冷痛阈值(P<0.05)。④与奥沙利铂组相比,siRNA注射后第18和21天,SCN8A-siRNA-3组大鼠机械痛缩足阈值及冷痛阈值均升高(P<0.05)。结论:抑制Nav1.6表达可缓解奥沙利铂引起的神经病理性疼痛。
- 潘桢婕李攀阳李磊冀建伟白倩李志业
- 关键词：奥沙利铂神经病理性疼痛膜电位
