王秀男
- 作品数：4 被引量：12H指数：3
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- 眼镜蛇毒细胞毒素的分离纯化及细胞毒素--1选择性抑制HSC--LX2细胞的研究
- 目的:通过层析法从眼镜蛇毒中分离高纯度高生物活性的细胞毒素-1(CTX-1)和细胞毒素-2(CTX-2)，以人肝正常细胞(HL7702)为对照探索CTX-1和CTX-2对人肝星状细胞(HSC-LX2)是否有选择性抑制作用...
- 王秀男
- 关键词：眼镜蛇毒细胞毒素分离纯化人肝星状细胞
- 广西眼镜蛇毒细胞毒素-1对人肝星状细胞LX2的选择性抑制作用被引量：4
- 2019年
- 肝纤维化是肝硬化、肝癌和肝功能衰竭的共同病理基础和必经阶段,特征是肝内细胞外基质(extracellular matrix,ECM)过度沉积。肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)是合成ECM的关键细胞,因此抑制其增殖并诱导其凋亡是抗肝纤维化的关键[1]。细胞毒素(cytotoxin,CTX)是眼镜蛇毒的主要活性成分,生物活性多样,对多种细胞均具有细胞毒性[2],在抗肿瘤研究中具有广阔的应用前景[3]。
- 王秀男陶慧娟陈荣芳班建东农君廖明张学荣
- 关键词：肝纤维化眼镜蛇毒分离纯化
- 眼镜蛇毒细胞毒素-4N的分离纯化及其对HSC-T6细胞的作用被引量：3
- 2017年
- 为了得到高纯度眼镜蛇毒细胞毒素-4N,探索眼镜蛇毒中细胞毒素-4N(cytototxin-4N,CTX-4N)对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC-T6)的增殖抑制作用。本研究采用DEAE-Sepharose CL-6B阴离子交换柱、Spehadex G-50凝胶层析柱、Macro-prep High S阳离子交换柱结合的方法对眼镜蛇毒蛋白进行分离纯化。在每一步分离纯化过程中,采用CCK-8法检测各蛋白峰组分对HSC-T6细胞的增殖抑制作用活性,收集增殖抑制作用最强的CTX-4N峰。经SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度,Nano-LC-ESI-MS/MS质谱方法鉴定其组分,Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂检测CTX-4N对肝星状细胞(HSC-T6)的增殖抑制作用,从而确定其药理作用。经DEAE-Sepharose CL-6B阴离子交换柱、Spehadex G-50凝胶层析柱、Macro-prep High S阳离子交换柱分离纯化后得到一个电泳纯度的蛋白,蛋白质谱鉴定为CTX-4N,分子量约为9.605 k D。不同浓度的CTX-4N作用HSC-T6细胞24 h后,随着其浓度的增大对HSC-T6细胞增殖抑制作用越强,呈剂量-效应关系,IC_(50)为(12.836±0.045)μg/m L。因此,本研究建立一种眼镜蛇毒细胞毒素-4N的分离纯化方法,并确定了其对HSC-T6细胞的增殖抑制的药理作用随浓度的增加而增强,为进一步研究其药理作用提供一定的理论依据。
- 孙林张学荣蔡凤桃王秀男余雷廖明班建东
- 关键词：眼镜蛇毒分离纯化肝星状细胞
- 眼镜蛇毒NGF通过PI3K/Akt促人肝星状细胞凋亡的机制研究被引量：7
- 2018年
- 目的探讨眼镜蛇毒神经生长因子NGF对肝纤维化关键细胞LX2的作用及机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度NGF和LY294002对LX2细胞增殖的影响,流式法检测NGF对LX2细胞凋亡的影响,Western blot法研究NGF和LY294002单用与联用对p-Akt蛋白水平表达的影响。结果NGF可降低LX2细胞存活率,最小有效浓度为1 mg·L^(-1);增加LX2细胞凋亡率;降低p-Akt表达水平,而对Akt的表达水平无明显影响。结论 NGF可通过抑制PI3K/Akt信号通路的激活,促进LX2细胞凋亡,并有一定的浓度依赖性。本研究对阐明肝纤维化的发病机制,为临床上治疗肝纤维化均有重要意义。
- 蔡凤桃张学荣孙林王秀男廖明班建东陈缨农君
- 关键词：人肝星状细胞眼镜蛇毒凋亡PI3K/AKT
