周晨俊
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 供职机构：复旦大学更多>>
- 发文基金：上海市科委国际合作基金湖北省教育厅科学技术研究项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 结核分枝杆菌Rv1168c蛋白的基因表达、纯化及结构分析被引量：2
- 2010年
- 【目的】应用原核表达体系对结核分枝杆菌PPE蛋白家族Rv1168c进行高效表达,进一步进行蛋白纯化和结构分析。【方法】以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,扩增Rv1168c基因,构建pET32a-Rv1168c重组质粒;转化重组质粒到大肠杆菌DH5α并在BL21(DE3)诱导表达,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺电泳(SDS-PAGE)鉴定Rv1168c在大肠杆菌中的表达情况;Ni-NTAHis﹡Bind Resin纯化重组蛋白Rv1168c;SDS-PAGE和质谱分析测定相对分子量后,用圆二色光谱(CD)和同源模建方法分析和检测重组蛋白Rv1168c的二级和三级结构。【结果】成功克隆了971bp的目的基因Rv1168c,并获得了高纯度的重组蛋白Rv1168c。重组蛋白的分子量为51.5kDa(含载体蛋白)。25℃时重组蛋白Rv1168c的二级结构包括34.4%α螺旋,33.7%β转角,31.9%无规则卷曲,它的三维模型显示为(β/α)5结构。【结论】成功得到高纯度的重组目的Rv1168c蛋白,并初步进行了结构分析,为进一步对Rv1168c结构和功能研究奠定了基础。
- 余晓丽孙战强周晨俊温子禄陈军孙庆文王洪海张舒林
- 关键词：结核分枝杆菌基因表达蛋白纯化圆二色谱
