杨冬梅
- 作品数：2 被引量：12H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 东方山羊豆盐诱导抑制差减杂交文库构建及其表达序列标签分析被引量：4
- 2010年
- 为筛选东方山羊豆盐诱导差异性基因,以250 mmol/L NaCl处理的东方山羊豆cDNA为实验组,未经诱导刺激的为驱动组,利用抑制性消减杂交技术(SSH)构建消减文库并对其部分阳性克隆进行了ESTs序列分析。该消减文库克隆的重组率为92%,插入片段大部分集中在0.2～1kb之间。随机挑取500个克隆进行测序及同源性分析,获得258个cleanESTs,经聚类、拼接,去除冗余序列,共获得132个Unigene,其中含有32个contigs和100个singlets,该文库的冗余度为24%。对其进行功能预测及分类,得到大量参与信号转导、转录调控、渗透和代谢调节、机体防御以及光作用等过程的相关基因。随机选择非重复的4个差异表达的序列设计引物,以半定量PCR方法验证其消减效率,结果显示,诱导组的表达量显著高于非诱导组,表明该文库有较高质量,且所采用的技术手段有助于快速发现东方山羊豆新功能基因。
- 宋清晓王学敏高洪文Dzyubenko NikolayChapurin Vladimir韩永增杨冬梅李玉坤
- 关键词：东方山羊豆抑制消减杂交ESTS
- 东方山羊豆4香豆酸:辅酶A连接酶(4CL)基因的克隆和荧光定量表达分析被引量：10
- 2010年
- 东方山羊豆(Galega orientalisL.)是20世纪末引种到我国的牧草品种,为发掘其基因资源,本实验克隆出东方山羊豆4 CL基因,并深入研究4 CL基因对东方山羊豆抗逆性的影响,为今后东方山羊豆在我国的种植和应用奠定基础。结果表明:采用RACE技术结合RT-PCR方法从东方山羊豆中获得一个编码4 CL基因的cDNA全长序列,命名为Go4 CL。该序列全长1916 bp,开放阅读框1653 bp,编码510个氨基酸。利用Real-Time PCR方法检测发现,Go4 CL基因在东方山羊豆的根中表达量最高,叶中表达量最少。在PEG、ABA、MeJA、SA胁迫处理下Go4 CL基因的表达量均有不同程度的上调,说明此基因在植物抵御干旱、病菌侵袭和机械损伤等胁迫过程中能够起到调控作用。
- 杨冬梅王学敏高洪文Dzyubenko NikolayChapurin Vladimir韩永增宋清晓董洁
- 关键词：东方山羊豆基因克隆荧光定量PCR
