肖燕
- 作品数：7 被引量：71H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家科技支撑计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株主要囊膜糖蛋白GP5的遗传变异分析被引量：18
- 2008年
- 为了探究高致病性猪蓝耳病病毒(HP-PRRSV)的遗传变异特征,本研究对GenBank中235株HP-PRRSV GP5序列的遗传进化、主要氨基酸基序、抗原性以及N-糖基化位点数量和位置的变异进行了分析。结果表明HP-PRRSV之间的同源性较高,与其他参考毒株相比,这些病毒处于一个相对独立的分支中,而且与经典疫苗株的亲缘关系较远。这有助于解释经典疫苗株对于HP-PRRSV为何起不到理想的免疫保护效果。在病毒的中和表位序列中存在着规律的点突变,同时抗原性比较显示HP-PRRSV与经典毒株之间存在着一定的差异。绝大多数的HP-PRRSV的N-糖基化位点在数量上多一个,而且位置要向羧基端平移2个氨基酸,从而使得中和表位两侧直接与糖链相连,可能会造成中和表位被糖侧链所遮掩,本研究由此推测减弱中和抗体对HP-PRRSV的有效识别,促进病毒逃避机体体液免疫。
- 安同庆田志军肖燕姜一峰韦天超彭金美周艳君仇华吉童光志
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征GP5糖基化
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒感染猪肺泡巨噬细胞的差异转录基因文库构建被引量：1
- 2009年
- 为鉴定高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)HuN4株感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)后,细胞内转录发生差异的基因,本研究采用抑制性消减杂交技术,以HP-PRRSV HuN4株感染后48h的PAM细胞mRNA为实验方(Tester),以未感染的PAM细胞为驱动方(Driver)进行消减杂交,得到了HP-PRRSV HuN4株感染后PAM内转录后发生上调的基因。反之,实验方与驱动方互换进行消减杂交,得到了HP-PRRSV HuN4株感染后PAM内转录后发生下调的基因。将2种杂交所得的差异转录基因经PCR扩增后分别克隆到T载体中并转化大肠杆菌感受态细胞,从而构建了正向(上调)和反向(下调)的差异cDNA文库。随机挑取文库中的多个克隆用PCR方法进行鉴定,结果表明差异文库中的cDNA具有较好的多样性。本研究为下一步的文库克隆的序列测定与差异基因的功能分析奠定了基础。
- 肖燕安同庆田志军韦天超姜一峰彭金美周艳君仇华吉童光志
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒抑制性消减杂交差异基因
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4株致弱毒株特异性抗原表位的鉴定被引量：2
- 2009年
- 通过对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,HP-PRRSV)HuN4株亲本毒及其不同代次传代毒株Nsp2(Nonstndural protein2)蛋白氨基酸序列比较分析,发现不同代次的Nsp2蛋白存在4处氨基酸点突变,针对每个突变点分别人工合成编码短肽的核苷酸序列,经原核表达后进行Western blot分析。结果表明表达的融合蛋白F65-11(749KGEPVSDQPAK759)能够特异性的与HuN4-F40、HuN4-F65和HuN4-F112感染猪的血清发生反应,而与HuN4F5感染猪的阳性血清和CH-1a株阳性血清不发生反应,证实第4个氨基酸点突变(S754)处存在一个免疫优势抗原表位。将该表位肽段由N端和C端逐步缩短继续鉴定,当N端缩短到第5个氨基酸(754SDQPAK759)C端缩短到第3个氨基酸(749KGEPVSDQ757)时,表达的融合蛋白不能与PRRSV阳性血清反应,最终推测该抗原表位必需氨基酸为753VSDQ756。选取GenBank中提交的部分高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的Nsp2氨基酸序列,对该表位氨基酸所在位置进行序列比较,分析结果显示位于Nsp2蛋白749→759位氨基酸序列高度保守,F65-11变异位点C754→S754为HuN4株系列传代毒株所特有。本研究结果证实抗原表位F65-11可以作为鉴别HuN4-F112弱毒疫苗所诱导产生的特异性抗体的候选抗原。
- 姜一峰周艳君田志军安同庆肖燕韦天超王瑜彭金美于海李国新闫丽萍张善瑞童光志
- 关键词：PRRSV抗原表位
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒感染后猪肺泡巨噬细胞的差异转录基因文库的构建
- 近年来在我国境内出现了高致病性猪蓝耳病,较以往相比,该病的病原——高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的致病力显著增强,对机体的病理损伤也要严重得多。然而目前对于PRRSV的分子致病机制还知之甚少。一般而言,病毒...
- 肖燕安同庆田志军韦天超姜一峰周艳君彭金美童光志
- 文献传递
- 猪IFN-γ mRNA TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：15
- 2009年
- 为建立一种检测猪γ-干扰素（IFN-γ）的荧光定量RT—PCR方法，针对猪IFN-γ基因和管家基因cyclophilin A（CyPA）的核苷酸序列分别设计了特异性引物和TaqMan荧光探针，以重组质粒pMD18-T-IFN-γ和pMD18T-CyPA为标准品，进行实时荧光定量RT-PCR检测，并构建猪IFN-γ mRNA和CyPA的荧光定量RT—PCR标准曲线。结果表明，建立的方法在1×10^1～1×10^7copies／μL模板范围内具有良好的线性关系，相关系数产均高达0．999，扩增效率均高于99．0％；可检测至少为100 copies的阳性标准品。该方法具有快速、敏感性高、特异性强和重复性好等特点，可应用于临床样品的检测。
- 韦天超田志军周艳君安同庆肖燕彭金美姜一峰童光志
- 关键词：IFN-Γ荧光定量RT-PCR
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒感染后猪肺泡巨噬细胞的差异转录基因文库的构建
- 近年来,我国境内出现了高致病性猪蓝耳病,较以往相比,该病的病原-高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的致病力显著增强,对机体的病理损伤也要严重得多。然而,目前对于PRRSV
- 肖燕安同庆田志军韦天超姜一峰周艳君彭金美仇华吉童光志
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒Taq Man-MGB荧光定量RT-PCR方法的建立和应用被引量：36
- 2008年
- 本研究设计针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因的特异性引物和Taq Man荧光探针,建立了一种检测PRRSV的快速、敏感、特异和重复性好的Taq Man荧光定量RT-PCR方法。该方法在检测101拷贝/μL～107拷贝/μL模板范围内具有良好的线性关系,比常规RT-PCR更敏感,可分别检测?
- 韦天超田志军安同庆周艳君肖燕姜一峰郝晓芳张善瑞彭金美仇华吉童光志
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光定量RT-PCR病毒含量
