冀敏
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：中国农业大学农学与生物技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金云南省省院省校科技合作计划项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 葡萄蔗糖转运蛋白基因VvSUC27的克隆及其植物表达载体的构建
- 2010年
- 本研究从赤霞珠(Vitis viniferaL.cv.Cabernet Sauvignon)葡萄果实中提取RNA,克隆得到葡萄蔗糖转运蛋白基因VvSUC27;从中蔬6号番茄子叶提取DNA,克隆得到番茄果实特异启动子基因E8。以实验室保存的pCAMBIA 1301为起始载体,分别构建了2个植物表达载体pCE8-SUC27vs和pCE8-SUC27。在这两个载体中,VvSUC27的表达均受番茄果实特异启动子E8的调控,pCE8-SUC27vs含有来自拟南芥葡萄糖转运蛋白基因AtVGT1的细胞液泡膜定位的信号肽编码序列和NOS终止子;pCE8-SUC27包含来自葡萄的蛋白质细胞质膜定位的信号肽编码序列和NOS终止子。在pCE8-SUC27vs质粒的基础上,构建了E8控制下的GUS植物表达载体pCE8-GUS。植物表达载体通过冻融法成功地转入到农杆菌EHA105菌株中。将包含不同质粒的根癌农杆菌注射到番茄果实中进行了启动子功能的瞬时表达验证,获得了阳性GUS染色结果。研究为下一步葡萄蔗糖转运蛋白基因VvSUC27在果实中的特异表达分析奠定了基础。
- 冀敏曾磊赵凤霞陈尚武马会勤
- 关键词：VITISVINIFERA
- 葡萄愈伤组织RNA提取方法比较及部分基因的表达差异初步分析被引量：2
- 2009年
- 以欧亚种酿酒葡萄品种赤霞珠（Vitis viniferaL.cv.Cabernet Sauvignon）的胚性愈伤组织（EC）和非胚性愈伤组织（NEC）为材料,进行了总RNA不同提取方法的比较.结果表明葡萄EC和NEC的总RNA的最佳提取方法是RNAp lant试剂法.通过此方法提取的总RNA完整性好,28S和18S条带清晰,且OD260/280 nm值都在1.8~2.0之间.以此RNA为模板,对actin,tubulin,CLV等基因进行了半定量RT-PCR对比,发现EC与NEC在不同基因表达上存在差异.以上结果说明,以RNAp lant试剂提取的RNA质量,可以满足cDNA合成和qRT-PCR等研究用途.这为深入研究葡萄花药愈伤组织胚性与非胚性细胞系的基因表达特点,以及葡萄体细胞胚发育过程中的基因时序表达奠定了基础.
- 代茹冀敏舒小梅陈尚武张文马会勤
- 关键词：愈伤组织总RNA提取RT-PCR
