张琳
- 作品数：2 被引量：12H指数：2
- 供职机构：中山大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 复合型组织工程皮肤的体外快速构建被引量：4
- 2007年
- 目的寻找一种体外快速构建复合型组织工程皮肤的方法,为大面积烧伤、创伤创面的覆盖提供足够的自体皮源。方法取人的包皮,进行表皮细胞及成纤维细胞的分离鉴定及体外培养扩增,对表皮细胞群行广谱角蛋白抗体-异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate,FITC）、角蛋白19（cytokeratin19,K19）-FITC免疫荧光染色及K19流式细胞仪鉴定;对成纤维细胞行波形蛋白-FITC免疫荧光鉴定。将表皮细胞接种于异体脱细胞真皮（acellular dermalmatrix,ADM）乳头面,于气-液平面培养构建表皮层,实验分两组进行,实验组培养基中添加25ng/ml角化细胞生长因子（keratinocyte growth factor,KGF）,对照组不添加。6d后,接种成纤维细胞于两组ADM的另一面,继续培养24h。收集构建的组织工程皮肤,切片行苏木素-伊红染色,观察所构建皮肤的镜下结构,并对比添加KGF对其影响。结果免疫荧光染色培养扩增的表皮细胞群广谱角蛋白抗体-FITC染色均为阳性、K19-FITC染色部分阳性,流式细胞仪鉴定其中K19阳性表达的细胞接近17%。成纤维细胞体外培养7d可扩增超过100倍,波形蛋白-FITC免疫荧光染色呈阳性。经过7d的体外培养构建,可以得到复合型皮肤,经苏木素-伊红染色镜下观察显示,实验组表皮层连续,形成细胞层数2-3层的复层结构,真皮中含有成纤维细胞;对照组表皮层不连续,细胞层数少,两组比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论利用胶原酶结合胰蛋白酶消化法进行种子细胞的分离,应用添加KGF的条件培养基,采用分步接种构建的方法,可在7d内构建出复合型组织工程皮肤。
- 杨斌洪清琦丘日升张琳董月桐
- 关键词：组织工程皮肤体外
- 组织工程皮肤种子细胞的同期快速分离被引量：11
- 2006年
- 目的寻找一种快速可行的同期分离组织工程皮肤种子细胞——表皮细胞及成纤维细胞的方法。方法取手术切除包皮,利用型胶原酶结合胰蛋白酶消化法,同期分离表皮细胞及成纤维细胞,观察细胞形态。对表皮细胞及表皮干细胞行PAN-FITC、K19-FITC荧光免疫染色及K19流式细胞仪鉴定;对成纤维细胞行波形蛋白FITC免疫荧光鉴定。并分别对两种细胞培养7d,观察其生长情况。结果应用型胶原酶结合胰蛋白酶,在3h内快速分离得到表皮细胞及成纤维细胞,免疫荧光染色表皮细胞PAN-FITC染色均为阳性、K19-FITC染色部分阳性,流式细胞仪鉴定其K19阳性表达的细胞接近17%。表皮细胞培养48h开始呈克隆样增长,至7d生长停滞,向终末的角细胞分化。成纤维细胞体外培养7d可扩增100倍,波形蛋白FITC免疫荧光染色呈阳性。结论利用胶原酶结合胰蛋白酶消化法可在3h内同期分离到用于构建复合型组织工程皮肤的种子细胞,为复合组织工程皮肤的快速构建提供了可能。
- 杨斌洪清琦徐令丘日升张琳董月桐
- 关键词：皮肤表皮干细胞
