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人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2双基因共表达腺病毒载体转染人骨髓基质干细胞后的细胞增殖被引量：2: 2012年; 背景:利用重组腺病毒载体转染外源性基因到组织工程骨的种子细胞是骨缺损基因治疗研究的热点。目的:用人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2双基因共表达腺病毒载体转染人骨髓基质干细胞,以探讨基因转染对人骨髓基质干细胞增殖的影响。方法:将Ad-hBMP2-IRES-hFGF2转染至人骨髓基质干细胞中,荧光显微镜观察转染效果,RT-PCR方法观察人骨形态发生蛋白2cNDA和人成纤维细胞生长因子2cNDA在人骨髓基质干细胞中的转录情况,Westerblot方法检测人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2蛋白表达情况,锥虫蓝测定细胞活力,流式细胞仪分析其对细胞增殖的影响。结果与结论:转染后人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2基因在mRNA水平和蛋白水平均有表达,细胞活力无明显变化,流式细胞仪分析细胞周期中增殖细胞比例明显增加。说明该双基因可高效转染人骨髓基质干细胞,且促进细胞增殖。; 郭伟韬王辉刘思景曾荣肖启贤陈子秋黄云王斌胡资兵; 关键词：腺病毒人骨形态发生蛋白2 骨髓基质干细胞干细胞

人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2双基因共表达腺病毒载体的构建及鉴定被引量：1: 2010年; 背景:内部核糖体进入位点序列载体能将上下游基因共同转录,故通过此载体可使连接在一起的人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2同时高表达,可为骨缺损的治疗提供新方法。目的:实验通过引入内部核糖体进入位点序列,采用基于attLXattR的λ噬茵体位点特异性重组系统的GatewayTM技术构建带有人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2双基因重组腺病毒载体并进行鉴定。方法:用聚合酶链反应方法扩增人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2目的基因,将两个基因亚克隆至pIRES2-EGFP载体中,构建phBMP2-IRES-hFGF2载体,通过BP反应将hBMP2-IRES-hFGF2重组到载体pDONR221中,再通过LR反应将其转移到腺病毒载体pAd/CMV/V5-DEST中,线性化后转染293细胞进行包装获得重组腺病毒Ad-hBMP2-IRES-hFGF2。结果与结论:phBMP2-IRES-hFGF2经酶切及测序鉴定正确,带hBMP2-IRES-hFGF2的载体在293细胞中包装成功,获得成熟的病毒颗粒,病毒滴度为2.82×1010ifu/mL,证实成功构建了带有人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2双基因重组腺病毒载体。; 郭伟韬刘思景王辉肖启贤陈子秋黄云王斌; 关键词：人骨形态发生蛋白2 腺病毒载体转染

BMP-2和p38MAPK在小鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化中的作用被引量：8: 2012年; 目的观察骨成型蛋白(BMP)-2和p38丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)在小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)向成骨细胞分化中的作用。方法体外分离和扩增小鼠BMSC,分为对照组、BMP-2组及阻断剂组,其中BMP-2组加入BMP-2,阻断剂组加入SB203580(p38MAPK通路阻断剂)和BMP-2。测定碱性磷酸酶(ALP)活性、钙沉积量、p38MAPK表达。结果与对照组相比,BMP-2组BMSC中ALP活性和钙沉积量增加(P<0.01),p38MAPK表达较早出现。阻断剂组p38MAPK表达明显延迟,与对照组相似。结论 BMP-2可通过p38MAPK通路促进BMSC向成骨细胞分化。; 孙欣曾荣郭伟韬肖启贤王斌黄云林颢; 关键词：P38MAPK 骨髓间充质干细胞成骨细胞

股骨粗隆间骨折三种内固定治疗方法疗效比较被引量：10: 2012年; [目的]通过对粗隆间骨折加压滑动鹅头钉、锁定钢板和髓内钉治疗方法的比较,选择合适的手术治疗方法。[方法]对2003年5月～2011年9月本科收治的265例粗隆间骨折手术患者进行回顾性分析,其中加压滑动鹅头钉组87例,锁定钢板组113例,髓内钉组65例。[结果]265例均获随访,时间16～36个月,平均24个月,优良率:加压滑动鹅头钉组91.9%,锁定钢板组94.7%,髓内钉组90.7%,术后Harris评分比较有统计学意义(P=0.000)。[结论]3种治疗方法以锁定钢板效果最佳,但各有优缺点,临床上应根据年龄、体质及骨折类型选择合适的治疗方法。; 孙欣曾荣陈俊虎郭伟韬黄云王斌; 关键词：粗隆间骨折加压滑动鹅头钉锁定钢板髓内钉

突触形成调控蛋白的研究与进展被引量：1: 2012年; 背景:干细胞在体外也被证实可以分化为神经元细胞,然而干细胞分化成神经细胞后如何形成突触连接而实现信息传递功能,以及突触形成的调控机制是什么,这些尚未可知。目的:通过对2000年以来影响突触形成调控蛋白的实验研究检索,总结这些蛋白在突触研究中的作用。方法:以"synapse、synaptogenesis"为检索词,应用计算机检索中国知网和pubmed数据库相关文章,排除重复性研究,保留39篇文章做进一步分析。结果与结论:突触形成的过程主要包括3个方面的相关内容:①突触结构的形成。②一些突触由无活性到有活性的转换。③非必要突触的消除。而与之相关的蛋白及其功能得以肯定并得到初步研究的主要有血小板反应蛋白、突触分化诱导基因产物、突触细胞黏附分子、主要组织相容性复合物Ⅰ型、肌细胞增强因子2、脆性X智力低下蛋白等。这些蛋白在突触的形成,发育和成熟过程中发挥着重要作用。; 黄云郭伟韬王斌; 关键词：突触突触形成蛋白脊髓损伤

大鼠脊髓神经元的分离、培养与鉴定被引量：1: 2012年; 目的通过对新生大鼠脊髓神经元分离、培养过程中细节的探讨,建立一种高效、稳定的大鼠脊髓神经元培养方法,为研究脊髓损伤相关的病理生理及其治疗提供种子细胞。方法取新生SD大鼠的脊髓组织,通过木瓜酶消化制成单细胞悬液,经差速贴壁后种于12孔细胞培养板内,用无血清培养基培养,倒置显微镜观察细胞生长状态,免疫细胞化学对神经元β-ⅢTubulin行特异性荧光素染色,结合DAPI核染色鉴定神经细胞及其含量。结果该方法培养的脊髓神经元生长状态良好、密度适中,纯度较高,约83%。结论采用木瓜酶消化、差速贴壁及无血清培养的新生大鼠脊髓神经元符合体外实验的要求,为进一步进行相关实验提供目的细胞。; 王斌郭伟韬黄云; 关键词：脊髓神经元细胞培养无血清培养基

大鼠pEGFP-C3/BMP-2真核表达载体的构建: 2012年; 目的通过克隆大鼠的BMP2基因,构建EGFP-C3/BMP2基因的真核细胞表达载体。方法把大鼠的基因组DNA通过PCR获得BMP2,克隆构建载体pEGFP/C3-BMP2,并将其转化到大肠杆菌里面,最后进行重组真核表达载体pEGFP-C3-BMP2的构建和鉴定,并可观察其在真核细胞中的表达。结果以大鼠总DNA为模板扩增出1200 bp左右的特异性条带,测序结果与Gene-Bank测序结果相比,翻译成的氨基酸序列相同并完全一致,并可在真核细胞中表达。对重组质粒pEGFP-C3/BMP2进行双酶切鉴定并测序,结果也完全一致。结论为进一步研究利用BMP2基因修饰骨组织工程骨,促进骨折愈合再生提供实验基础。; 孙欣曾荣郭伟韬肖启贤王斌黄云林颢; 关键词：PCR 真核表达载体构建

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黄云