史宏博
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：吉林大学第一医院更多>>
- 发文基金：吉林省科技厅重点项目吉林省杰出青年科学基金长春市科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人肌红蛋白原核表达载体的构建、表达及蛋白纯化
- 2007年
- 目的:构建人肌红蛋白(Mb)原核表达载体并诱导其表达、纯化及鉴定目的蛋白。pQE方法:根据已报道的人Mb基因序列,采用RT-PCR技术从人骨骼肌组织中获得肌红蛋白cDNA序列。将所得的PCR产物插入克隆载体pGEM-Teasy中,得重组质粒,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,将酶切目的片段插入原核表达载体pQpQEE30中并转化大肠杆菌(E.coli)M15,通过IPTG诱导表达出带有6个组氨酸的融合蛋白。经镍固定金属亲和层析纯化。结果:序列分析表明,人Mb基因成熟肽编码区含有465 bp,编码153个氨基酸;与GenBank(NM203378)中已报道的Mb核苷酸序列有98.50%同源性。经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳和免疫印迹分析显示,表达的融合蛋白占菌体蛋白总量的31%,相对分子质量约为16700,并与商品化的人Mb单抗呈特异性反应。经Ni2+-NTA agarose纯化获得SDS-PAGE电泳下单一条带。结论:在大肠杆菌中获得了人Mb的高效表达。
- 车媛媛许淑芬方艳秋段秀梅史宏博刘晓林刘力华候巍谭岩
- 关键词：肌红蛋白基因表达大肠杆菌
- Flt3配体基因原核表达载体的构建、表达、纯化及生物学活性鉴定被引量：3
- 2007年
- 目的:获得人Flt3配体(FL)cDNA胞外段序列,构建表达人FL蛋白的原核重组表达载体并诱导其表达、纯化及鉴定目的蛋白。方法:提取K562细胞总RNA,利用巢式PCR技术扩增出目的cDNA序列,构建重组质粒pGEM-FL,经酶切、PCR和测序鉴定后,将rhFL基因亚克隆到原核表达质粒PQE30,构建重组表达质粒PQE30-rhFL,在大肠杆菌M15中诱导表达。用镍凝胶亲和层析方法纯化目的蛋白,Westren blotting杂交鉴定纯化蛋白,并用造血集落形成实验检测生物学活性。结果:经测序证实,获得的目的基因与GenBank公布的FL基因序列100%一致。构建的原核表达载体PQE30-rhFL在大肠杆菌M15中经1 mmol.L-1IPTG诱导后表达出相对分子质量为25000的蛋白,镍柱纯化后经抗组氨酸单克隆抗体进行Westren blotting,在相对分子质量为25000处可见特异性着色带。结论:构建了原核表达载体PQE30-rhFL,并成功诱导了rhFL蛋白的表达,通过镍凝胶亲和层析法获得纯度较高的rhFL蛋白。
- 刘小林段秀梅方艳秋谭岩史宏博车媛媛刘力华
- 关键词：配体原核表达巢式聚合酶链反应
