姜爽
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：佳木斯大学基础医学院更多>>
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- 4T42肽腺病毒载体的构建包装及抗SKBR3乳腺癌细胞的效果
- 2012年
- 目的构建携带有肿瘤抑素相关T42肽(以下简称T42肽)基因的重组腺病毒载体,并转染HEK293细胞中进行病毒包装,最终感染SKBR3乳腺癌细胞,体外四倍体T42肽(4T42)抗SKBR3乳腺癌细胞的效果。方法利用同尾酶连接技术将T42肽进行两次克隆形成4T42,并将其亚克隆至穿梭质粒pEC3.1(+)-EGFP中,获得重组质粒pEC3.1(+)-EGFP-4T42。体外重组至骨架载体pAd/BLOCK-iTTM-Dest(pAd-BL-Dest),获得重组质粒pAd-EGFP-4T42。将该重组骨架质粒转染HEK293细胞,利用RT-PCR方法和荧光显微镜观察标志蛋白-绿色荧光蛋白的表达情况以判断T42转染成功与否。利用病毒倍比稀释法利用荧光显微镜检测病毒滴度,用重组腺病毒感染SKBR3乳腺癌细胞。采用流式细胞仪检测感染重组腺病毒的SKBR3胞凋亡率,MTT实验检测感染重组腺病毒的MCF细胞的生长情况。结果重组腺病毒载体经酶切鉴定证明构建正确,重组腺病毒获得成功包装,纯化的病毒滴度为4*108 DRP/ml。重组腺病毒rAd-EGFP-4T42感染MCF细胞后较对照组未转染空白组细胞凋亡率高(P<0.05);Ad-EGFP-4T42质粒转染组与对照组相比,明显抑制MCF细胞生长(P<0.05)。结论体外4T42肽具有显著促进SKBR3乳腺癌细胞凋亡和抑制SKBR3乳腺癌细胞生长的作用。
- 祁冬冬陈英利郭建壮朱贵明张涛姜爽王宇卓
- 关键词：肿瘤抑素腺病毒载体绿色荧光蛋白
