张巧利
- 作品数：7 被引量：36H指数：5
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 蜜蜂精子介导GFP基因转移研究被引量：4
- 2007年
- 将pGFP-2质粒线性化，利用精子介导，通过人工授精技术导入意大利蜜蜂处女王，然后将授精王介绍到无王群繁殖后代。结果：试验群产生了一群绿色荧光阳性蜜蜂；对阳性蜂群后代分析发现，1-2日龄幼虫能检测到荧光，提取蜜蜂DNA进行PCR扩增得到预想的片断，通过RT-PC分析，从转录水平上证实转导的外源基因获得表达。结论：以绿色荧光蛋白（GFP）基因为报告基因，通过精子介导法能够生产克隆转基因蜜蜂。
- 郭冬生张巧利孙亮先
- 关键词：意大利蜜蜂精子基因转移GFP
- 一种高质量蜜蜂核酸的快速提取方法被引量：10
- 2005年
- 基因组DNA的提取是蜜蜂分子生物学研究的一项基本而重要的技术.但由于蜜蜂样品具有脂肪、蛋白、几丁质含量很高的特点,所以用常规方法无法获得较高质量的DNA.文章研究对蜜蜂基因组DNA的提取方法作了重要改进,可以从不同发育时期的蜜蜂中快速、大量提取高质量的蜜蜂基因组DNA.此外,对蜜蜂总RNA的提取方法也进行了探索.
- 郭冬生孙亮先张巧利曾志将
- 关键词：蜜蜂总RNA基因组DNA
- 蜜蜂转基因技术被引量：5
- 2005年
- 简述了建立蜜蜂转基因技术体系的方法和筛选标记.以显微注射法将改造过的pig-gyBac、mariner等转座子转基因载体导入受精卵是蜜蜂转基因工作的最佳候选方案,精子介导法和病毒载体法也值得尝试.增强型荧光蛋白(EGFP)基因是转基因蜜蜂的最佳筛选标记.并对蜜蜂转基因技术体系在基因功能研究和生物反应器的开发等方面的应用前景进行了探讨.
- 张巧利孙亮先郭冬生胥保华
- 关键词：蜜蜂转基因显微注射转座子精子
- 蜂王浆介导外源基因转移的初步研究被引量：2
- 2008年
- 采用DNA延滞实验研究蜂王浆与DNA的结合能力,然后通过蜂群哺育和人工培育两种方式,对1日龄工蜂幼虫进行短期饲喂,初步研究蜂王浆介导绿色荧光蛋白基因的方法和转移情况。结果表明:在蜂群环境下,蜂王浆中的外源DNA短期内不会完全被分解;但用蜂王浆作媒介并未实现蜜蜂基因转染,蜜蜂能否通过蜂王浆介导实现基因转移,还需进一步探讨。
- 郭冬生孙亮先张巧利
- 关键词：蜂王浆基因转移中华蜜蜂
- 电穿孔导入法在意大利蜜蜂卵基因转移上的应用被引量：5
- 2008年
- 研究目的是探讨电穿孔技术在意大利蜜蜂卵基因转化中应用的可能性。实验用质粒pEGFP-Nl对意大利蜜蜂卵电转导条件优化进行系统研究,然后利用所得到的电穿孔优化条件,对大量意大利蜜蜂早、晚期卵进行绿色荧光蛋白基因转移研究。实验结果获得1组较佳电学参数：脉冲电压750 V/cm,脉冲时间160μs,电击次数1;意蜂早期卵阳性表达率为0.31%～0.90%,晚期卵为0.00%～0.30%。结果表明电穿孔法可以促使意大利蜜蜂卵摄入外源基因,且意大利蜜蜂早期卵电转导效果比晚期卵好。
- 郭冬生孙亮先黄志祥张巧利
- 关键词：电穿孔绿色荧光蛋白基因基因转移
- 中华蜜蜂精子介导egfp基因转移被引量：13
- 2007年
- 中华蜜蜂Apis cerana cerana是一种真社会性昆虫，也是我国重要的经济昆虫。本实验目的是为了检测精子是否可以作为载体将外源egfp基因介导转入中华蜜蜂。首先将雄蜂精子与线性化的质粒DNA共浴，然后通过人工授精技术将精子导入处女王，再对实验蜂群后代进行分析。结果显示EGFP蛋白在一群实验组蜂的1～2日龄小幼虫中表达较强，能检测到0．01％～0．02％荧光阳性小幼虫个体；通过PCR和RT—PCR技术分析，证实转入的外源egfp基因获得表达。实验结果表明精子载体法能够用于中华蜜蜂外源基因的转移和表达。
- 郭冬生孙亮先曾志将张巧利
- 关键词：中华蜜蜂精子基因转移EGFP基因精子载体法
