李月颖
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 供职机构：河北师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：河北省重大科技攻关项目河北省高等学校科学技术研究指导项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- PCR-焦磷酸测序技术检测奶牛乳房炎4种主要致病菌方法的建立被引量：2
- 2012年
- 应用PCR-焦磷酸测序技术(pyrosequencing)一种新型快速检测奶牛乳房炎(bovine mastitis)4种主要致病菌无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)、停乳链球菌(S.dysgalactiae)、沙门氏菌(Salmonella sp.)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的方法。根据GenBank中无乳链球菌的sip基因、停乳链球菌的isp基因、沙门氏菌的stn基因和金黄色葡萄球菌的clfa基因的序列信息,分别设计各基因保守区段的PCR扩增引物及焦磷酸测序引物。分别以108株无乳链球菌、100株停乳链球菌、136株沙门氏菌、203株金黄色葡萄球菌,以及多株其他参照菌为模板,轮流使用上述各扩增引物进行PCR扩增目的基因片段。随后采用焦磷酸测序技术针对阳性PCR扩增片段进行核苷酸保守区段的测序分析。最终得到预期的PCR扩增和焦磷酸测序结果,且实验结果具有可靠的重复性。PCR-焦磷酸测序技术适用于上述奶牛乳房炎4种主要致病菌的检测鉴定,具有准确、快速等优点。
- 剧慧栋李月颖张乐祎李秀娟赵宝华徐保红
- 关键词：奶牛乳房炎无乳链球菌停乳链球菌
- 停乳链球菌ISP基因的克隆与表达及其免疫原性研究被引量：5
- 2015年
- 根据GenBank报道的停乳链球菌免疫分泌蛋白基因(immunogenic secreted protein,ISP)序列设计引物,PCR扩增得到1 550bp的isp片段,其基因序列与GenBank提交序列的同源性为98.13%.将isp基因与表达载体pET-25b(+)连接,成功构建重组质粒pET-25b(+)-isp.转化大肠杆菌BL21(DE3),成功得到阳性表达重组菌株BL21(pET-25b(+)-isp).经IPTG诱导后,SDS-PAGE与Western blot检测得到约55ku的目的蛋白.经优化确定,isp蛋白的最优表达条件:1mmol/L IPTG,37℃诱导18h,且此时表达的蛋白具有良好的抗原性.该研究制备了奶牛乳房炎停乳链球菌的基因工程疫苗,并对其免疫原性进行了探究,为奶牛乳房炎的免疫防治奠定了基础.
- 李月颖朱松剧慧栋刘文青赵宝华裴艳涛
- 关键词：奶牛乳房炎停乳链球菌基因工程疫苗免疫原性
- 停乳链球菌isp基因的克隆与原核表达
- 2014年
- 根据GenBank报道的停乳链球菌(Streptococcus dysgalactiae)isp基因(GenBank:CP002215.1)序列设计引物,PCR扩增得到isp基因。片段大小为1 500 bp,与从GenBank下载的序列进行同源性比对结果为98.57%。将isp基因克隆于表达载体pET-25b,成功构建了重组质粒pET-25b-isp,将重组质粒分别转化BL21(DE3),将BL21(pET-25b-isp)阳性重组菌株经IPTG诱导后,SDS-PAGE结果显示均有蛋白表达,大小分别为53 ku与目的蛋白大小相符;Western blot检测显示,表达的蛋白为目的蛋白。对成功构建的菌株BL21(pET-25b-isp)表达条件经优化后,在温度37℃,诱导时间12 h,IPTG浓度为1 mmol/L时,蛋白有较高的表达量。
- 剧慧栋李月颖马宁李晓丽赵宝华秦丽云吕国平郭玉梅王苋徐保红
- 关键词：停乳链球菌分泌蛋白克隆
