王世峰
- 作品数:1 被引量:2H指数:1
- 供职机构:厦门大学海洋与地球学院亚热带海洋研究所更多>>
- 发文基金:福建省科技重大专项更多>>
- 相关领域:生物学更多>>
- 重组质粒pcFlaA在青石斑鱼肌肉中的表达研究被引量:2
- 2007年
- 在哈维氏弧菌TS-628菌株鞭毛丝蛋白FlaA基因末端加上一段编码Flag短肽的核苷酸序列作为检测标记后,将该基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),酶切、PCR扩增及重组质粒测序证实基因片段插入正确,将该重组质粒命名为pcFlaA.将pcFlaA以肌肉注射方式免疫青石斑鱼.免疫后第7天开始检测鞭毛丝蛋白在石斑鱼肌肉中的表达状况,之后每隔1周检测1次,共检测4次.首先采用PCR技术在DNA水平检测重组质粒转染石斑鱼肌肉细胞的情况,再以RT-PCR法在mRNA水平上检测转染质粒在鱼肌肉中的转录,最后以免疫组化染色技术在蛋白质水平上检测目的蛋白的表达.结果在DNA及mRNA水平上均可检测到目的条带,在蛋白质水平上可检测到明显阳性位点,由此证实pcFlaA可以转染石斑鱼肌肉细胞并可在其中进行表达,而且质粒在鱼体内持续表达的时间至少1个月.
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- 关键词:DNA疫苗哈维氏弧菌青石斑鱼