高玉晓
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：安徽医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点实验室开放基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 利用单线虫两重PCR技术对秀丽隐杆线虫线粒体DNA拷贝数进行相对定量的方法被引量：1
- 2013年
- 目的基于单线虫两重PCR技术,利用细胞核DNA(nDNA)作为内参研究秀丽隐杆线虫线粒体相对数量的实验条件,进而建立一种相对定量秀丽隐杆线虫线粒体DNA(mtDNA)拷贝数的方法。方法首先以秀丽隐杆线虫nDNA和mtDNA序列为模板,利用多重PCR引物设计软件MPprimer和引物特异性评估软件MFEprimer V2.0设计两重PCR引物;然后针对以单线虫为PCR扩增模板的处理条件进行摸索,包括蛋白酶K的消化浓度及反应时间;最后研究秀丽隐杆线虫nDNA片段和mtDNA片段扩增后到达平台期的时间,进而比较不同循环数扩增下秀丽隐杆线虫线粒体拷贝数相对定量的可行性。结果单线虫经蛋白酶K 60℃消化及95℃灭活处理后,能较特异地扩增出nDNA和mtDNA;单线虫PCR模板的处理条件为50μg/ml蛋白酶K 60℃处理2 min并于95℃灭活10 min;线粒体拷贝数相对nDNA而言,趋于稳定的PCR循环数为26。结论建立了一种以为nDNA内参快速相对定量线粒体拷贝数的方法,为线粒体DNA拷贝数相关的实验研究提供了技术支撑。
- 高玉晓吴永红叶巧李志慧张成岗
- 关键词：线粒体DNADNA拷贝数
- 秀丽线虫的蛋白质组学研究
- 2012年
- 作为模式生物,秀丽线虫(Caenorhabditis elegans)已经成功地用于许多生命过程的研究,尤其被广泛应用于现代发育生物学、行为与神经生物学、基因组学、正向和反向的遗传学研究中,近年来,秀丽线虫更成为了一个进行蛋白质组学研究的优良体系,诠释了基于基因组学和RNA干涉研究中的基因功能。许多比较蛋白质组学表达谱的建立可以更好地理解线虫在不同发育阶段、不同温度下基因的表达,在与人类神经疾病相关的疾病研究中,线虫对帕金森疾病、阿尔茨海默症、衰老与寿命、胰岛素通路都有所揭示。另外,线虫的亚蛋白质组学和翻译后修饰如糖基化和磷酸化也已经鉴定,其数据库也在不断地完善。本文介绍了秀丽线虫的蛋白质表达谱建立的历史,尤其是神经科学研究中的应用及翻译后修饰表达谱的建立等方面的研究现状,因此,结合其它分子生物学和基因工程技术,线虫蛋白质组学研究已成为提供一个新的全面的系统分析基因功能的重要工具,提示线虫是"蠕虫蛋白质组学"的一个丰富宝藏。
- 李华玲陈文飞高玉晓王凯秦燕刘丹丹张成岗
- 关键词：秀丽线虫蛋白质组学翻译后修饰
