张天园
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
- 供职机构：沈阳药科大学生命科学与生物制药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金云南省应用基础研究基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 山梨糖脱氢酶基因在酮古龙酸菌中的过表达被引量：1
- 2016年
- 目的在酮古龙酸菌中克隆并过表达山梨糖脱氢酶基因,以便提高单菌发酵产2-酮基-L-古龙酸的能力。方法从酮古龙酸菌DSM4025基因组中克隆获得山梨糖脱氢酶基因(sorbose dehydrogenase,sdh),酶切连接到含有双亲本接合转移关键基因即可移动基因(mobilization,mob)的p BBR1MCS-2质粒上,构建p BBR1MCS-2-sdh重组质粒;再将p BBR1MCS-2、p BBR1MCS-2-sdh分别转入供体菌大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)S17-1中,以酮古龙酸菌(Ketogulonigenium sp.)Rif-B-003为受体菌进行双亲本接合转移。挑取利福霉素(Rifamycin,Rif)和卡那霉素双抗平板上的接合子进行聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、双酶切和测序验证。取重组菌进行摇瓶发酵,用菌体蛋白的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)电泳结果来验证阳性克隆的过表达成功,并检测发酵终点2-酮基-L-古龙酸的产量。结果构建的重组质粒p BBR1MCS-2-sdh成功转入酮古龙酸菌(Ketogulonigenium sp.)Rif-B-003中,SDS-PAGE检测到,发酵终点菌体蛋白在58 ku(目标蛋白)处条带有加深,重组菌株发酵终点2-酮基-L-古龙酸产量相比于对照菌株酮古龙酸菌(Ketogulonigenium sp.)Rif-B-003提高了20.86%。结论山梨糖脱氢酶基因在酮古龙酸菌Rif-B-003里过表达成功,可以提高发酵终点2-酮基-L-古龙酸的产量。
- 王威勋李燕李野张天园张怡轩
- 关键词：山梨糖脱氢酶2-酮基-L-古龙酸
- 天青蛋白基因在酮古龙酸菌中的克隆与表达
- 2016年
- 目的克隆来源于脱氮副球菌的天青蛋白基因(pden1359),并在酮古龙酸菌(Ketogulonicigenium sp.)Rif-B-003中表达。方法利用酶切酶连的方法构建重组质粒pBBR1 MCS-2-pden1359,并以接合转移的方法将重组质粒导入到菌株Rif-B-003中。采用双酶切、PCR验证获得阳性重组菌Rif-B-003/pBBR1 MCS-2-pden1359,SDS-PAGE检测Pden1359的蛋白表达,分光光度法检测菌体内过氧化氢和超氧阴离子浓度。结果成功构建重组质粒pBBR1 MCS-2-pden1359并导入菌株RifB-003中获得重组菌Rif-B-003/pBBR1 MCS-2-pden1359,重组菌体SDS-PAGE显示在目的蛋白处有表达条带。在发酵各个时期,重组菌株比对照菌株Rif-B-003体内过氧化氢浓度均降低,最多降低1.05×10-8umol·cfu^(-1)(16.21%),超氧阴离子浓度也降低,最多降低8.52×10^(-1)1umol·cfu^(-1)(13.98%)。结论来源于脱氮副球菌的天青蛋白基因pden1359在酮古龙酸菌Rif-B-003中成功表达,可以降低菌体内活性氧水平。
- 王培琪马玉李野张天园张怡轩
- 关键词：脱氮副球菌2-酮基-L-古龙酸
- 槲寄生药材亲缘关系的RAPD分析被引量：2
- 2019年
- 本研究以半寄生性药材-槲寄生为研究对象,利用RAPD分子标记技术,以生长环境和寄主植物为要素,旨在探讨这两个因素对槲寄生药材亲缘关系的影响。研究表明:10个RAPD引物在15个槲寄生样本中共扩增出190条带,其中多态性带143条,多态性比率高达75.26%。采用NTSYSpc软件的UPGMA法构建聚类系统树型图,当相似性系数为0.657时,以产地为基础,可以将15个槲寄生样本分为3类。槲寄生样本间的遗传多样性有显著差异:来自河北和黑龙江的槲寄生亲缘关系较近,辽宁地区的槲寄生样本与河北及黑龙江的槲寄生相似性小,亲缘关系相对较远;而来源于不同寄主种属的槲寄生亲缘关系错综复杂,对聚类系谱的划分影响较小。分析结果表明,不同槲寄生药材通过RAPD方法聚类谱系,未能与其寄主种属形成对应关系,但很可能与其生长的地域之间存在一定联系。这为进一步研究槲寄生药材与寄主和产地间的复杂关系提供了更有利的现代研究手段和理论参考。
- 龙猜宾文李艳梅郭佳鑫张天园于治国赵云丽
- 关键词：槲寄生RAPD聚类分析亲缘关系
- 格氏乳球菌促进小鼠生长的研究被引量：3
- 2014年
- 研究格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)制备的菌剂对小鼠生长的影响。取60只昆明系雄性小鼠,随机分成3组,分别进行喂养,考察对照组、菌剂组、抗生素组的小鼠生长性能、免疫功能、抗氧化功能和盲肠菌群的变化。结果显示,格氏乳球菌该菌剂能显著提高小鼠的平均体重、降低料重比、提高抗氧化能力。对免疫器官指数无显著影响,能显著提高十二指肠食糜SIgA含量,优化盲肠菌群结构。格氏乳球菌可以促进小鼠生长,为开发一种有效的新型饲料添加剂提供科学依据。
- 付娜娜来琳琳张天园李晓晨项雪松杨健张怡轩
- 关键词：益生菌免疫功能抗氧化功能盲肠菌群
