张晓芳
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 供职机构：天津医科大学总医院更多>>
- 发文基金：天津市应用基础与前沿技术研究计划国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- HABP1基因慢病毒干扰和表达载体的构建及表达被引量：2
- 2013年
- 目的构建慢病毒介导的透明质酸结合蛋白1基因(HABP1)干扰载体及表达载体,建立HABP1降表达及过表达的稳定肾癌细胞系786-0。方法合成人HABP1基因短发夹RNA(shRNA)干扰序列,与慢病毒载体pLKO.1-TRC连接产生重组质粒pLKO.1-shHABP1;双酶切质粒pCDNA3.1(-)-HABP1-Flag,将目的基因片段连接到pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro载体上,组成重组表达载体pCDH-HABP1;酶切鉴定及DNA测序后,转染293T细胞,收集慢病毒颗粒感染786-0细胞,嘌呤霉素筛选稳定细胞系,western blot验证HABP1蛋白的表达水平。结果构建成干扰载体pLKO.1-shHABP1及表达载体pCDH-HABP1;与随机序列对照组比较,pLKO.1-shHABP1转染的786-0细胞HABP1表达水平(0.30±0.01)明显降低(t=25.98,P<0.05),pCDHHABP1转染786-0细胞后,HABP1的表达水平(3.20±0.40)明显升高(t=10.34,P<0.05)。结论成功构建HABP1基因的干扰载体及表达载体,且786-0细胞可稳定降表达及过表达HABP1。
- 苑博张晓芳陈雅婧田芳闫雪苗刘运德岳丹
- 关键词：肾癌细胞慢病毒载体
