王春燕
- 作品数：6 被引量：13H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金甘肃省农业生物技术研究与应用开发项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 羊传染性脓疱病毒ORF047基因表达及其蛋白在细胞中的定位分析被引量：2
- 2018年
- 目的克隆羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV)ORF047基因,并进行真核表达及亚细胞定位,为筛选与其相互作用的蛋白提供依据。方法提取羊传染性脓疱病毒分离株的DNA,以其为模板,参照OV-SA00毒株(NC-005336.1)基因ORF047序列,采用PCR技术扩增ORFV ORF047基因片段,凝胶回收后将其插入pEGFP-N1载体,构建重组质粒pEGFPORF047,测序后重组质粒共转染293T细胞,Western blotting鉴定融合蛋白的表达。后将重组质粒pEGFP-ORF047与pHcRed1-Nuc、pHCRed1-mito、pHcRed1-ER分别共转染Vero-E6细胞,通过激光共聚焦显微镜对融合蛋白进行亚细胞定位分析。结果 ORFV ORF047基因片段大小为735bp;重组质粒pEGFP-ORF047能够在293T细胞中明显表达融合有目的分子的绿色荧光蛋白,Western blotting检测表达的融合蛋白大小约54kD;亚细胞定位分析表明,ORF047蛋白主要定位于胞浆中,少量在线粒体中。结论成功分析了ORF047基因的表达与其蛋白在亚细胞定位。
- 陈国华贾怀杰何小兵王春燕金启旺景志忠
- 关键词：羊传染性脓疱病毒
- 高原型实验小型猪——合作小型猪的培育与应用被引量：3
- 2021年
- 近交系小型猪(Sus scrofa)的培育是大型动物实验动物化的重点方向和趋势,中国农业科学院兰州兽医研究所以1对合作猪为系祖,采用“近亲交配”和异地实验动物化培育,历时18年培育成功了国际上首个高原型近交系小型猪。该研究成果填补了国内外高原型小型猪的研究空白,为大型哺乳动物实验动物化培育和应用提供了理论依据和技术基础。本文介绍了实验用合作小型猪的基本特性与利用优势,培育过程与遗传控制,以及其在抗病免疫研究中的应用。
- 景志忠房永祥陈国华贾怀杰何小兵李军成高真贞莫斯科冯海燕王春燕李守杰曾爽杨帆高建平姚文娟李政厅景伟曹健民张春祥
- 关键词：近交系实验动物
- 口疮病毒B4R锚蛋白抑制细胞NF-κB信号通路的研究被引量：6
- 2016年
- 为明确口疮病毒(ORFV)编码的B4R蛋白调节细胞N F-κB活化的作用,以ORFV ORF008基因编码的B4R蛋白为研究对象,构建真核表达载体p CM V-Flag008,转染293T细胞,首先,利用双荧光素酶报告基因系统分析B4R蛋白对NF-κB信号活化的调节作用;其次,采用W estern-blot检测B4R蛋白对NF-κB信号通路中NF-κB p65蛋白核移位和IκBα蛋白磷酸化水平的影响。结果显示,B4R蛋白对NF-κB转录因子报告载体荧光素酶活性有明显的抑制作用(P<0.05);B4R蛋白能阻止IκBα蛋白磷酸化降解过程而抑制细胞NF-κB p65蛋白核移位。由此可见,ORFV编码的B4R蛋白能抑制细胞NF-κB信号通路的活化。
- 冯园贾怀杰何小兵成温玉陈国华王春燕何玉林景志忠
- 关键词：NF-ΚB
- 猪瘟C株疫苗诱导PBMCs中SLA等位基因差异性表达分析被引量：2
- 2018年
- 猪主要组织相容性复合体(SLA)广泛参与机体免疫应答与调节,具有重要的免疫学研究意义。在转录水平上对猪瘟C株疫苗免疫后猪外周血单个核细胞(PBMCs)中SLA的表达情况进行了初步研究。猪瘟C株疫苗免疫试验猪后,在0、3、5、9d分别采集4头猪的抗凝血分离外周血单个核细胞,通过逆转录荧光定量PCR技术(RT-qPCR)对外周血单个核细胞中的SLA进行转录水平的相对定量检测;并对试验猪SLA上调表达明显的cDNA模板进行了SLAⅡ类分子的克隆、测序及其系统发育树分析。结果显示,猪瘟C株疫苗免疫后,PBMCs中SLAⅠ、SLAⅡ类分子在短时间内均出现上调表达,一段时间后发生回降;测序分析发现,上调表达的SLA-DRA、SLA-DRB分子中存在高频表达序列。结果提示,猪瘟C株疫苗能够刺激机体产生猪瘟病毒相关的免疫应答,并存在SLA等位基因优势选用现象,这种优势选用可为猪瘟表位肽疫苗的研制提供理论依据。
- 李守杰贾怀杰成温玉王春燕金启旺景志忠
- 猪T细胞受体β链转录组与基因组分子结构研究进展
- 2015年
- T细胞受体(TCR)是T细胞的表面标志,作为T细胞识别和结合内/外源性抗原的表面分子,TCR在免疫应答和免疫调节中发挥着重要的作用。但由于其基因的遗传多样性和结构复杂性,对猪αβT细胞特别是病原感染或免疫特异的克隆性增殖规律研究在国内尚属空白。随着对猪免疫系统的研究深入,对其TCR的研究也取得了很大进展,本文综述了猪TCRβ链不同组成区域的分类、转录组的多样性及复杂性、基因组的结构特征等方面的研究进展,以加深对猪TCR结构复杂性的认识和理解,为特异性TCR的筛选奠定理论基础。
- 姚文娟房永祥刘泰安王春燕景志忠
- 关键词：T细胞受体基因组转录组
- 猪瘟病毒C株特异的TCR Vα5和Vβ6真核表达载体的构建及共转染研究被引量：1
- 2016年
- 本实验室前期研究发现猪瘟病毒C株特异的TCR Vα5和TCR Vβ6基因家族,为进一步研究其体外表达情况,应用RT-PCR从猪外周血单个核细胞中扩增其全长基因序列,并构建TCR Vα5-pIRES2-EGFP和TCR Vβ6-pIRES2-EGFP重组质粒,将其转染293T细胞。结果显示,TCR Vα5和TCR Vβ6全长基因分别为816bp和945bp,双酶切和核酸序列测定证实TCR Vα5-pIRES2-EGFP和TCR Vβ6-pIRES2-EGFP重组质粒构建正确;转染293T细胞24h后荧光显微镜下可以看到70%以上的细胞表达EGFP蛋白。此外,实时荧光定量PCR可检测到TCR Vα5和TCR Vβ6基因的表达,单独转染组和共同转染组Western blot均可检测到EGFP蛋白的表达,且蛋白杂交带强度相似。研究结果表明,CSFV-C株特异性的TCR Vα5-pIRES2-EGFP和TCR Vβ6-pIRES2-EGFP真核表达质粒可同时转染到293T细胞中,实现体外共表达。
- 王春燕陈国华何小兵曾爽贾怀杰房永祥冯园李守杰景志忠
- 关键词：TCR
