- 携带1型BVDV-E<Sup>rns</Sup>基因的高繁殖力猪瘟弱毒标记疫苗的构建方法
- 本发明涉及生物技术领域，旨在提供一种携带1型BVDV‑E<Sup>rns</Sup>基因的高繁殖力猪瘟弱毒标记疫苗的构建方法。本发明利用分子克隆以及反向遗传方法，将CSFV‑C株基因组的Erns和E2基因的VR1区分别用...
- 方维焕王作欢李肖梁曹统
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- 携带1型BVDV-E<Sup>rns</Sup>基因的高繁殖力猪瘟弱毒标记疫苗的构建方法
- 本发明涉及生物技术领域，旨在提供一种携带1型BVDV‑E<Sup>rns</Sup>基因的高繁殖力猪瘟弱毒标记疫苗的构建方法。本发明利用分子克隆以及反向遗传方法，将CSFV‑C株基因组的Erns和E2基因的VR1区分别用...
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- 猪瘟弱毒标记疫苗候选株RecC-M1对猪的安全性研究被引量：2
- 2022年
- 为探究猪瘟弱毒标记疫苗候选株RecC-M1(将牛病毒性腹泻病毒1型E^(rns)和猪瘟病毒基因2型流行株E2高变区分别置换弱毒疫苗C株对应区域构建而成)对猪的安全性,本实验以2.0×10^(5)FAID_(50)(50%荧光抗体感染剂量)高剂量的RecC-M1株经颈部肌肉注射接种12头35日龄猪瘟病毒(CSFV)抗体阴性仔猪,另设生理盐水对照组6头。接种后观察各组猪的临床症状,并于接种后不同时间(0、1 d、3 d、5 d、7 d、14 d、28 d和42 d)采血用于细胞计数;接种后7 d和42 d各取6头猪(包括第42 d对照组6头猪),剖杀后观察各组织剖检病变,并取各组织制作切片观察组织病变,采用qPCR检测病毒在各组猪各组织中的分布。根据qPCR结果,选择阳性组织样品(扁桃体、肾脏和淋巴结)的病理切片采用免疫组化法检测RecC-M1株在猪上述各组织中的分布。于接种后0~7 d、14 d、28 d和42 d分别采集各组猪的鼻拭子和肛拭子样品以及不同时间采集的血液,均采用qPCR检测各组猪的病毒血症及排毒;采用间接ELISA分别检测各组猪血清中分别针对BVDV及CSFV相应抗原的抗体水平。结果显示,RecC-M1组猪在42 d的观察期内均未出现临床症状,体温、白细胞数和淋巴细胞数与阴性对照组猪均无明显差异,且均在正常范围内;剖检及组织病变观察结果显示,接种后7 d和42 d猪的各组织均未见淤血或出血;扁桃体、淋巴结、脾、肾、膀胱、回盲瓣等CSFV嗜性组织均未见明显的病理学变化;各组织样品的qPCR结果显示,接种后7 d所有6头猪的肾脏和扁桃体样品和2头猪的淋巴结样品中均检出CSFV核酸,而接种后42 d所有猪的组织样品均为阴性;免疫组化结果显示,接种后7 d猪扁桃体和肾脏样品中CSFV抗原均呈阳性,接种后42 d猪的所有组织样品则均转为阴性;病毒血症和排毒的qPCR结果显示,接种后14 d内部分猪血液、鼻拭子和肛拭子样品中检出CSFV核酸,接种后28 d和42 d所�
- 叶超锋曹统王作欢陈荣王媛徐永昊许翰坤韩笑张鹏超蓝胜芝吴桃芬杨香林李肖梁方维焕
- 关键词：猪瘟
- 携带2型BVDV-E<Sup>rns</Sup>基因的高繁殖力猪瘟弱毒标记疫苗的构建方法
- 本发明涉及生物技术领域，旨在提供一种携带2型BVDV‑Erns基因的高繁殖力猪瘟弱毒标记疫苗的构建方法。本发明利用分子克隆及反向遗传方法，将BVDV2‑890#毒株的E<Sup>rns</Sup>基因和CSFV流行毒株Q...
- 方维焕曹统李肖梁王作欢
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- 猪瘟病毒基因2型流行毒株和疫苗C株抗血清与相应E2蛋白交叉免疫反应性分析被引量：2
- 2017年
- 为研究猪瘟病毒(CSFV)2.1基因亚型病毒株和疫苗C株E2蛋白与相应抗血清的免疫反应性差异,本研究在分析4株CSFV浙江流行株(QZ-14、JH-14、QZ-07和HZ-08)与疫苗C株E2变异程度的基础上,制备了流行病毒株和疫苗C株全病毒猪抗血清以及针对流行株E2的单克隆抗体(MAb)4F4,比较了它们与同源株和异源株重组杆状病毒表达的E2蛋白的亲和性。结果显示,4株浙江分离株中2株(QZ-14和JH-14)属于亚型2.1d,另2株(QZ-07和HZ-08)为亚型2.1b,它们与C株E2的核苷酸同源性在82%~84%;间接免疫荧光鉴定显示MAb 4F4能够识别4株流行株,但不与C株反应;接种流行株的动物均出现不同程度临床症状;ELISA分析显示疫苗C株血清与流行株E2蛋白的反应性约为C株E2蛋白的27%~49%,2株流行株感染血清与C株E2蛋白反应性约为流行株E2蛋白的34%~50%,免疫印迹分析显示类似结果。以上结果表明CSFV基因2型流行株与疫苗C株E2蛋白的差异显著影响其与相应抗血清的交叉免疫反应性,这一现象是否与C株猪瘟疫苗免疫保护效果下降有关还有待于进一步研究。
- 廖迅王作欢曹统谷元兴李肖梁方维焕
- 关键词：囊膜糖蛋白E2抗原性变异
- 置换弱毒C株非编码区的嵌合猪瘟病毒对猪的致病性研究
- 2024年
- 猪瘟(CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种高度接触性传染病。研究表明,CSFV的非编码区(UTR)与病毒复制和毒力相关。为了分析置换CSFV弱毒疫苗C株UTR的嵌合毒株对病毒复制和猪致病性的影响,以构建的C株和QZ14(CSFV 2.1 d型毒株)感染性克隆质粒pA-C和pA-QZ14为基础,扩增pA-C的UTR区和pA-QZ14除UTR以外的基因组序列,利用同源重组技术构建重组质粒pA-QZ14-CUTR;将体外转录的病毒基因组RNA转染PK-15细胞,连续传代以拯救嵌合病毒株QZ14-CUTR;将其接种PK-15细胞,通过免疫荧光和测序鉴定以确定拯救是否成功;RT-qPCR和毒价滴定法测定病毒生长趋势,分析其细胞适应性;将嵌合病毒以1×10^(5)TCID 50剂量肌肉接种试验猪以观察其致病性。结果表明,QZ14-CUTR拯救成功,基因组中稳定携带C株UTR序列;生长曲线显示,QZ14-CUTR病毒基因组拷贝数和滴度均低于亲本毒株QZ14;相较于QZ14株,QZ14-CUTR仅引起猪轻微的临床症状,不显著影响猪白细胞和淋巴细胞数;病理变化程度、排毒阳性率和组织中的病毒核酸阳性率均低于QZ14株;QZ14-CUTR能诱导特异性CSFV E2抗体,且抗体水平持续上升。综上所述,CSFV流行毒株QZ14的UTR被弱毒C株UTR置换后,其在PK-15细胞中的复制能力有所下降,对猪的致病力降低。
- 陈荣曹统叶超锋翁一帆贾德凯许翰坤毛俊勇韩笑韩笑李肖梁
- 关键词：猪瘟病毒感染性克隆
- 猪瘟弱毒标记疫苗候选株RecC-M1垂直传播可能性评价
- 2025年
- 为探究猪瘟病毒(CSFV)弱毒标记疫苗候选株RecC-M1在猪群中的垂直传播能力,采用二次免疫方案,以5.0×10^(3.5)TCID_(50)的RecC-M1经颈部肌肉注射接种12头后备母猪,另从试验猪场随机挑选20头按常规免疫程序以750 RID剂量给后备母猪接种猪瘟弱毒C株疫苗作为对照。接种后观察试验母猪临床症状并记录其产仔情况;首免后3、5、7、14 d采集母猪鼻拭子和肛拭子样品,并于母猪妊娠中期和分娩当日进行尾静脉采血,qPCR检测各组猪的病毒血症及排毒情况,ELISA检测猪血清中分别针对BVDV1和CSFV相应抗原的抗体水平;所有接种RecC-M1的母猪在生产当天留取2头新生仔猪(共24头)并在其吮吸初乳前安乐死后剖检,观察主要脏器大体病变情况,采集扁桃体、淋巴结、脾脏和膀胱组织用于组织病理学观察,血液样品用于猪瘟病毒抗体和核酸检测。结果表明,所有母猪免疫后均未出现临床症状,接种后2周内的拭子样品中未检测到病毒核酸,妊娠中期和分娩时血清中的RecC-M1 E2和BVDV1-E rns特异性抗体均维持在较高水平,RecC-M1接种母猪的胎均仔数、死胎数和弱仔数与对照组无显著差异。对RecC-M1接种母猪所产24头新生仔猪的剖检发现,扁桃体、淋巴结、脾脏、肾脏和膀胱均未见出血、肿大等病变;组织学结果显示,扁桃体、淋巴结、脾脏和肾脏的组织结构正常,均未见有出血性变化;仔猪血样和组织样品均无病毒核酸检出,亦未见抗体阳性。结果表明,CSFV弱毒标记疫苗候选株RecC-M1对母猪及仔猪都是安全的,不发生病毒的垂直传播,为该疫苗后选株的产业化开发奠定了基础。
- 许翰坤曹统王作欢张鹏超蓝胜芝吴桃芬杨香林李肖梁李肖梁
- 关键词：猪瘟
- 携带2型BVDV-E<Sup>rns</Sup>基因的高繁殖力猪瘟弱毒标记疫苗的构建方法
- 本发明涉及生物技术领域，旨在提供一种携带2型BVDV‑Erns基因的高繁殖力猪瘟弱毒标记疫苗的构建方法。本发明利用分子克隆及反向遗传方法，将BVDV2‑890#毒株的E<Sup>rns</Sup>基因和CSFV流行毒株Q...
- 方维焕王作欢李肖梁曹统
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