陈志军
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：安徽医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 以Has-miR-100-3p抑制剂慢病毒表达载体建立稳定感染A549细胞株被引量：1
- 2017年
- 目的用Has-miR-100-3p抑制剂的慢病毒来建立稳定感染人非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞株,为进一步研究miR-100在NSCLC细胞中的机制奠定基础。方法用has-miR-100-3p抑制剂的重组慢病毒液,以其最适浓度感染A549细胞,获得稳定感染慢病毒的A549细胞株。荧光显微镜观察细胞感染效率,实时定量聚合酶链锁反应(qRT-PCR)和流式细胞术(FCM)分别检测稳定感染慢病毒的A549细胞株中miR-100的表达量和细胞株中绿色荧光蛋白(GFP)表达情况。结果荧光显微镜下可见绿色荧光在细胞中表达。qRT-PCR检测结果显示,感染抑制剂的A549细胞中miR-100的表达量显著减少;流式细胞术检测感染组细胞中均有GFP的表达。结论获得了has-miR-100-3p抑制剂的慢病毒稳定感染的A549细胞株,该细胞株中内源性miR-100的表达下调。
- 陈志军徐陌姜玉任海风赵荣荣杨帆汪思应
- 关键词：慢病毒
- hsa-miR-100-3p抑制剂慢病毒表达载体稳定感染BEAS-2B细胞株的建立被引量：2
- 2016年
- 目的建立稳定感染人hsa-miR-100-3p抑制剂慢病毒表达载体的人支气管上皮(human bronchial epithelial,BEAS-2B)细胞株,为研究miR-100的功能奠定基础。方法根据hsa-miR-100-3p的成熟序列,设计其反向互补序列,用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的方法扩增目的基因,将目的基因与慢病毒载体GV280经双酶切后,进行定向连接,产生GV280-hsa-miR-100-3p-inhibitor慢病毒表达载体。将制备好的重组慢病毒质粒与两种辅助包装原件载体质粒共转染人胚肾上皮细胞293(human embryo kidney epithelial cell,HEK-293)T细胞,包装产生病毒颗粒并以最适滴度感染BEAS-2B细胞以获得稳定感染的细胞株。倒置荧光显微镜观察感染效率,用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)的方法检测重组慢病毒感染后BEAS-2B细胞中miR-100的相对表达量。结果测序结果表明,目的基因成功的连接到慢病毒载体上,重组慢病毒高效的感染了BEAS-2B细胞。RT-PCR检测发现,BEAS-2B细胞中miR-100的相对表达明显的下调了。结论稳定感染hsa-miR-100-3p抑制剂的BEAS-2B细胞株构建成功,敲低了细胞中内源性miR-100的表达。
- 董伟刘媛媛陈志军姜玉朱其苹汪思应
- 关键词：聚合酶链式反应慢病毒属微RNAS
