姚雪梅
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 一种以pH调控结合有机氮源补料提高ε‑聚赖氨酸产量的方法
- 本发明公开了一种提高ε‑聚赖氨酸(ε‑PL)产量的方法，所述方法为：在5L发酵罐中按接种量10％接完发酵液后，等初始pH6.8自然下降到一定pH值，自动流加12.5％的氨水使得pH维持一段时间不变，然后使其pH自然下降到...
- 扶教龙施磊吴晨奇李聪徐敏强陈宏伟李良智姚雪梅
- 文献传递
- 产L-蛋氨酸基因工程菌株的构建
- 2020年
- 以野生型蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)EN34为出发菌株,增强胱硫醚γ-合成酶基因(metI)表达,敲除或弱化腺苷蛋氨酸合成酶的编码基因metK,分析这2个基因的改变对蛋氨酸产量的影响。从枯草芽孢杆菌基因组中扩增P43强启动子,连接到pEB03质粒,利用重组连接的方法,将metI从Bacillus cereus EN34扩增重组连接到质粒,构建成pEB03-P43-SD-metI,通过电击转化到Bacillus cereus EN34,获得Bacillus cereus EN34(pEB03-P43-SD-metI)菌株。通过Bacillus cereus EN34扩增metK基因,提取质粒pKVM1以及重组连接等方法,构建出pKVM 1::metK′敲除质粒,将质粒电转化到Bacillus cereus EN34中进行metK交换,再筛选出单交换成功的菌株,最后获得metK弱化成功Bacillus cereus EN34Δ(metK)菌株。经发酵培养基硫源优化分析得出,单独增强metI表达不能提高蛋氨酸产量,产量与出发菌株基本一致;改变metK基因,能提高蛋氨酸产量,但不能完全删除metK基因,否则将导致细胞死亡。硫源采用200μL/L甲基硫醇钠和二甲基硫醚的混合物(体积比19∶1)、15 g/L的Na 2SO 4,二者结合,Bacillus cereus EN34Δ(metK)菌株蛋氨酸产量为440.66 mg/L,是出发菌株的20倍。本研究为芽孢杆菌工程菌的构建了提供一定的技术支持。
- 汤玥何浩波何凯陈馨茹胡翠英姚雪梅李良智
- 关键词：基因工程芽孢杆菌
