于文静
- 作品数：3 被引量：29H指数：3
- 供职机构：北华大学药学院更多>>
- 发文基金：吉林省科技发展计划基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 中药材川贝母标准品特异DNA指纹片段的克隆及鉴定被引量：5
- 2016年
- 目的建立一种能够有效保存川贝母标准品DNA指纹片段的方法。方法采用自主研制的川贝母DNA检测试剂盒提取基因组DNA,体外进行川贝母特异DNA片段克隆,与载体结合并导入生物宿主细胞,通过宿主细胞自我复制产生大量川贝母特异DNA克隆,继而采用质粒提取试剂盒将质粒提取出来,应用PCR及酶切方法检查并鉴定插入片段是否正确。将携带正品川贝母特异DNA序列的菌落置-80℃冰柜保存,分别以1个月、2个月、3个月和6个月为时间点进行复苏,进行稳定性考察。结果转入细胞内的川贝母DNA克隆经PCR扩增后,所得到的琼脂糖凝胶电泳图谱条带清晰,并且进行多次实验结果均一致。4个时间点复苏后的菌落进行PCR扩增后,其琼脂糖凝胶电泳检测图谱中,条带明亮且清晰。结论采用分子克隆技术保存川贝母特异基因片段的方法是可行且有效的,并且稳定性良好,可作为建立中药DNA指纹鉴定数据库的有效依据,方法简单明了,且结果可靠。
- 李萧涵李明成周亭亭于文静张丽华王冰梅
- 关键词：川贝母分子克隆指纹特征
- 蕲蛇DNA检测试剂盒的评价及应用被引量：16
- 2014年
- 目的研制一种蕲蛇DNA检测试剂盒,对试剂盒的特异性、稳定性、敏感性和重复性进行评价,并对市售蕲蛇药材进行质量考察。方法以《中国药典》(2010年增补版)蕲蛇DNA检测方法为基础进行改良,研制标准DNA检测试剂盒,随机抽取北京、天津、长春和吉林4个城市18个蕲蛇样品,采用试剂盒和药典方法进行检测。结果蕲蛇DNA检测试剂盒经反复冻融20次后依然有效。试剂盒的最低检测样品量为0.025 g,18个蕲蛇样品中14个样品为正品,4个样品为不合格品。3次重复性检测均可完全重现相同结果。试剂盒与药典法检测结果一致,特异性为100%。结论蕲蛇DNA检测试剂盒对蕲蛇药材鉴别准确有效,并且与药典法相比更加简单、快捷,这种方法在蕲蛇药材质量考察方面具有广阔的应用前景。
- 于文静周亭亭张丽华李明成王冰梅
- 关键词：蕲蛇试剂盒药典法
- 川贝母DNA检测试剂盒的研制与评价被引量：13
- 2014年
- 目的研制川贝母DNA检测试剂盒，确定试剂盒组成及操作程序，建立一种简便、快速鉴定川贝母的分子生物学检验方法。方法分别采用药典法（2010年版《中国药典》增补本）和试剂盒法提取川贝母基因组DNA，进行PCR反应和RFLP鉴定。结果采用药典法提取出的川贝母基因组DNA的OD260／OD280值最高为（1．57±0．05），而采用试剂盒法所提DNA的OD260／00280值可达（1．73±0．10）；两法PCR结果均在300bp上方有单一明亮条带；RFLP鉴定图谱均在100～250bp之间出现2条清晰条带。结论试剂盒法较药典法更稳定，且核酸提取量及纯度都高于药典法，2种方法PCR及RFLP鉴定结果完全一致。川贝母DNA检测试剂盒特异性好、灵敏度高、稳定性强，适用于川贝母的快速检测。
- 周亭亭于文静李明成王冰梅张丽华
- 关键词：川贝母聚合酶链式反应限制性片段长度多态性分析
