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甲型H1N1流感病毒血凝素单克隆抗体轻链和重链可变区基因的巢式PCR扩增及序列分析: 2013年; 目的:采用巢式PCR对甲型H1N1流感病毒血凝素单克隆抗体的轻链和重链基因进行扩增,对获得的基因进行序列分析,并找出克隆鼠Igκ轻链和重链可变区基因的通用方法。方法:设计22对扩增鼠Igκ轻链可变区和重链可变区基因的引物,对6株鼠抗人甲型H1N1流感病毒血凝素单克隆抗体的轻链和重链可变区基因进行克隆并测序,与NCBI公布的鼠免疫球蛋白序列比对分析。结果:巢式PCR方法可以有效避免单克隆抗体克隆过程的假基因,并且得到的单克隆抗体的氨基酸序列均符合鼠免疫球蛋白可变区特征。结论:建立了克隆鼠免疫球蛋白轻链和重链可变区基因的通用方法,为后期克隆鼠源性单克隆抗体的可变区基因提供了基础,并为研究甲型H1N1流感病毒血凝素与抗体的结合位点提供了实验数据。; 李慧瑾李研孙晶莹高锦伟赵向绒封青谭天天胡巧侠李元胡军; 关键词：甲型H1N1流感病毒可变区巢式PCR

溶瘤性腺病毒携带canstatin基因对肺癌A549细胞小鼠移植瘤的抑制作用: 2015年; 目的:研究溶瘤性腺病毒介导的canstatin基因表达对A549细胞的抑制作用。方法:将构建的溶瘤性腺病毒载体CRAd-canstatin感染A549细胞。Western blot方法鉴定canstatin基因在A549细胞中的表达;结晶紫染色法和MTT法检测重组病毒体外对细胞的生长抑制作用;将腺病毒注射入荷瘤的裸鼠体内,通过测量肿瘤体积,形态学观察等方法验证CRAd-canstatin对肿瘤的抑制效果。结果:体外结果显示腺病毒介导的canstatin基因在A549细胞中有效表达。体内结果显示相比对照组而言,肿瘤体积明显缩小。结论:初步的实验表明溶瘤性腺病毒介导的CRAd-canstatin基因有望用于肺癌细胞的治疗。; 李曙东齐宗利田伟冯杨萌王鑫赵向绒封青胡巧侠; 关键词：CANSTATIN 肺癌基因治疗

能够诱导神经元hnRNPA1蛋白发生核-质易位方法的比较: 2024年; 神经退行性病变是多发性硬化(MS)疾病进展的重要特征,异质核糖核蛋白A1(hnRNPA1)的功能障碍已被证明与神经退行性疾病的发病机制有关。临床研究发现,甲型流感病毒感染可促进MS患者病情加重,但具体机制不明。实验通过探讨影响hnRNPA1蛋白发生核质易位的可能因素,为MS的发生机制提供基础数据。首先培养人神经细胞SHSY5Y,然后检测该细胞中是否有hnRNPA1基因的表达;其次用细胞因子IL-17、TNF-α和IFN-γ及甲型流感病毒诱导机体产生的抗人hnRNPA1蛋白的自身抗体H1-84处理神经细胞;最后检测hnRNPA1蛋白的定位是否发生了变化。结果显示,用不同浓度的IFN-γ及抗人hnRNPA1蛋白的自身抗体H1-84均可引起SHSY5Y细胞中的hnRNPA1蛋白从细胞核转移到细胞质中,发生错误定位,功能失调的hnRNPA1可能在流感病毒感染促进MS疾病发生及发展过程中发挥了重要作用。; 郭春艳靳占奎靳占奎封青冯杨萌徐翠香; 关键词：干扰素自身抗体流感病毒

补体C5a及受体对人肾间质成纤维细胞增殖的影响及机制研究: 2022年; 目的探讨补体C5a及受体(C5aR)对人肾间质成纤维细胞(human renal interstitial fibroblasts,hRIFs)增殖及纤维化相关因子表达的影响。方法原代培养hRIFs细胞,对细胞进行鉴定后,检测C5aR表达情况;同用C5a和C5aR拮抗剂分别对hRIFs处理后检测细胞增殖、细胞外基质蛋白(fibronectin,Collagen-I)以及转化生长因子-β1(TGF-β1)的蛋白表达情况。结果hRIFs细胞vimentin蛋白表达阳性,desmin蛋白表达阴性,C5aR表达于hRIFs细胞表面。MTS实验结果显示:与对照组相比,C5a纯品(浓度分别为10,15,20nmol/L)刺激后第2h,8h的A值差异无统计学意义(P>0.05),刺激后第24h的A值(0.217±0.037 vs 0.613±0.016,0.793±0.041,0.887±0.039)显著升高,差异有统计学意义(t=4.891,4.211,8.408,均P<0.05)。与C5a纯品组相比,C5a纯品+C5aR拮抗剂组的A值明显降低(0.887±0.039 vs 0.424±0.016),差异有统计学意义(t=8.657,P<0.05)。Western-Blot结果显示,与对照组相比,补体C5a(20nmol/L)刺激后第24h,fibronectin(26091±128 vs 15400±105),Collagen-I(31229±129 vs 24823±136)以及TGF-β1(27855±161 vs 20326±152)蛋白表达水平都有明显增加,差异具有统计学意义(t=4.891,5.820,2.311,均P<0.05)。与C5a纯品组相比,C5a纯品+C5aR拮抗剂组fibronectin(22188±132 vs 26091±128),Collagen-I(27181±113 vs 31229±129)以及TGF-β1(25013±139 vs 27855±161)蛋白表达水平显著降低,差异具有统计学意义(t=2.349,1.618,3.774,均P<0.05)。结论补体C5a-C5aR相互作用可导致hRIFs细胞增殖、促纤因子TGF-β1表达升高及细胞外基质蛋白生成增加,对肾间质纤维化具有重要意义。; 朱娜冯婷冯杨萌封青李静艳; 关键词：补体C5A C5A受体人肾间质成纤维细胞肾间质纤维化

一种免疫抑制剂、鉴定方法及应用: 本发明属于生物医药技术领域，公开了一种免疫抑制剂、鉴定方法及应用，通过较青藤碱和柚皮素在小鼠骨髓干细胞诱导不成熟树突状细胞效率及诱导的imDC在小鼠皮肤移植模型发挥免疫抑制作用的差异，在用小鼠骨髓干细胞诱导imDC过程中...; 黄晓燕徐翠香赵向绒封青冯杨萌

抗人IgG和抗人IgM单克隆抗体的特性鉴定及应用被引量：3: 2018年; 目的:制备特异性高的抗人Ig G和抗人Ig M单克隆抗体,并应用于临床血清学检测试剂盒,为其提供优质的二抗。方法:以人Ig G和Ig M为抗原,免疫BALB/c小鼠,通过传统杂交瘤融合和筛选技术制备抗人Ig G和抗人Ig M单克隆抗体;经体内诱生法制备腹水并纯化;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western印迹进行交叉筛选和特异性鉴定,并对筛选出的单抗进行辣根过氧化物酶(HRP)标记,再与市售的检测病原微生物抗体试剂盒中对应的HRP标记的二抗(抗人Ig G和抗人Ig M)做对比分析。结果:筛选到2株可稳定分泌抗人Ig G单抗和2株抗人Ig M单抗,经交叉反应、Western印迹及对比实验分析,证明这4株单抗效价高、特异性好,比临床试剂盒中的酶标二抗特异性强、敏感度高。结论:获得4株特异性强、敏感度高的抗人Ig G和抗人Ig M单克隆抗体,可为各种病原微生物血清学的检测提供二抗试剂,具有良好的应用价值。; 封青郭春艳郭春艳王珍梁导艳李研; 关键词：人IGG 单克隆抗体

肿瘤的细胞免疫治疗研究进展被引量：4: 2012年; 随着抗原递呈机制与细胞对特异性抗原识别机制的揭示、众多重要的人细胞因子及其功能的发现、分子克隆与细胞克隆技术的发展,细胞免疫治疗日益受到重视,并成为肿瘤等疾病临床治疗新思路、新方法的研究热点,肿瘤的细胞免疫治疗技术也在近20年内得到了广泛深入的研究和临床实践。在此,我们简要综述近年来肿瘤的细胞免疫治疗研究进展。; 张煜封青胡军; 关键词：肿瘤细胞免疫治疗

柯萨奇病毒A16型快速纯化和中和性单克隆抗体制备与鉴定被引量：2: 2015年; 目的建立柯萨奇病毒A16型快速纯化方法,制备中和性单抗,并对单抗进行分析。方法收获CA16培养上清液,超滤浓缩,氯化铯密度梯度离心纯化病毒颗粒,透射电镜鉴定纯化产物。福尔马林灭活CA16,免疫BALB/c小鼠,制备分泌抗CA16特异性单抗的杂交瘤细胞系,用ELISA和中和试验分别对单抗特性进行分析。结果初步建立CA16病毒氯化铯密度梯度纯化方法,电镜显示,病毒颗粒为二十面体立体对称球形结构,病毒直径在20-30nm间,大小均匀。获得2株分泌抗CA16单抗的杂交瘤细胞系,2株单抗均为IgG2a亚型,Anti/CA16/5效价为10^3,Anti/CA16/10效价为104。2株抗体的中和效价分别为1∶256和1∶1 024。结论初步建立氯化铯密度梯度纯化CA16的方法,筛选出2株具有中和活性的抗CA16单抗,为CA16病毒的基础研究提供重要的原材料。; 刘杨赵向绒关璐媛王鑫郭春艳封青卫晶晶胡军余鹏博; 关键词：病毒纯化超速离心单克隆抗体

三聚氰胺单克隆抗体制备与鉴定被引量：3: 2020年; 目的制备高度特异的三聚氰胺单克隆抗体,经酶联免疫吸附试验鉴定并制备胶体金试剂盒。方法以牛血清白蛋白交联的三聚氰胺为抗原,免疫BALB/c小鼠,通过传统杂交瘤融合和筛选技术制备抗三聚氰胺单克隆抗体,经纯化制备腹水,采用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immune sorbent assay, ELISA)对抗体进行效价测定、亚类测定、交叉鉴定和蛋白质免疫印迹试验(westernblot)特异性鉴定后制备胶体金试剂盒。结果筛选出1株抗三聚氰胺单抗,制备的三聚氰胺胶体金试剂盒敏感值能达到30μg/L。结论获得了高度特异的且能稳定分泌三聚氰胺抗体的细胞株。; 封青李研李研李研孙晶莹; 关键词：单克隆抗体酶联免疫吸附

H1亚型流感病毒HA蛋白单克隆抗体的制备及部分特性鉴定被引量：4: 2012年; 目的:制备针对H1亚型流感病毒HA蛋白的单克隆抗体(mAb),并分析其反应特性。方法:分别以2009年甲型H1N1、季节性A1流感病毒裂解疫苗为免疫原,常规法免疫、融合、克隆化,获得各抗原特异性mAb。应用ELISA、HI试验和Western blot等技术研究mAb的反应性和特异性。结果:获得稳定分泌抗H1亚型流感病毒HA蛋白的杂交瘤细胞97株。其中株特异性mAb39株,29株具有HI活性;亚型特异性mAb7株,5株具有HI活性;2009年流行株与季节性A1、A3流行株共同抗原的mAb16株,9株具有HI活性;针对流感病毒共同抗原mAb35株,22株具有HI活性。结论:两种疫苗均具有较好的免疫原性和免疫保护活性,这些mAb的获得为流感病毒株特异、亚型特异性诊断试剂盒及流感病毒通用诊断试剂盒的制备提供了实验资料,为进一步研究H1N1流感病毒HA的抗原表位奠定了基础。; 郭春艳李慧瑾刘杨赵向绒王鑫封青李元胡军; 关键词：单克隆抗体

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