李鹏
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 玉米邻甲基转移酶基因bx12-ZaC546的克隆及其生物信息学分析
- 2018年
- 邻甲基转移酶是与玉米抗虫性密切相关的苯并噁嗪类化合物生物合成中的关键酶之一,由bx12基因编码。为深入研究bx12基因的表达与调控机理,该研究从我国玉米自交系ZaC546中克隆出了含有目的基因bx12的目标DNA片段Zm3325-ZaC546。测序结果证明:从ZaC546基因组中分离的目标DNA序列长度为1 010bp,含有完整的开放阅读框(ORF)。与玉米基因组数据库上的参考序列相比,目标DNA序列在其ORF的内部,从起始密码子的第1个碱基开始,下游第204个碱基位置上存在1个碱基突变,由G突变为A,遗传密码由AAG变为AAA,但氨基酸不变,都编码赖氨酸(Lysine,K)。虽然,目标DNA序列在其ORF的下游,第883个碱基G发生缺失,第905个碱基由T突变为C,但因这2个突变位于ORF的下游,并不影响目的基因的编码活性。目标DNA序列Zm3325-ZaC546与参考序列的一致性为99.70%,阅读框序列的一致性为99.87%;而由目的基因编码的蛋白质氨基酸序列与参考序列的一致性为100%。生物信息学分析结果表明:本研究中克隆的基因所编码的邻甲基转移酶蛋白属于邻甲基转移酶基因超级家族2。该酶是一种多功能酶,具有2个大的结构域,一个位于N-末端一侧,具有甲基转移酶蛋白二聚化功能;另一个位于C-末端一侧,具有甲基转移酶功能和邻甲基转移酶功能。
- 史娟娟冯贺刘恩卓李鹏郑大浩
- 关键词：玉米抗虫性原核表达载体生物信息分析
- 单体红色荧光蛋白基因DsRed2的克隆及其原核表达被引量：1
- 2016年
- 从原始质粒pDsRed2-1中分离红色荧光蛋白基因DsRed2、构建原核表达载体pGEX4T1-DsRed2，进行了原核表达。结果表明：目标DNA序列含有由678bp构成的开放阅读框（ORF），编码由225个氨基酸构成的蛋白（红色荧光蛋白，简称RFP2）。与参考序列相比，目标DNA序列在其ORF内存在一个单碱基的同义突变，所编码的目的蛋白氨基酸序列不变。DsRed2基因在常用的表达菌株BL21（DE3）和克隆菌株DH5et中都能够表达出目的蛋白RFP2，使菌落呈现红色。在BL21（DE3）中，在1～5h内，随诱导时间的延长，RFP2的表达量迅速增加，此后增加不明显。在原核细胞中表达出的RFP2，大多以难溶性包涵体形式存在，仅少量溶于细胞质中，但都能正常显示出红色。RFP2为单体红色荧光蛋白，且在自然光下即可激发出红色荧光；DsRed2作为报告基因，可以非常简单、方便地区分出阳性和假阳性菌落。
- 康泽然李鹏吴委林孙云轩朴世领郑大浩
- 关键词：原核表达包涵体
- 玉米超高蛋氨酸18kD δ-醇溶蛋白基因dzs18克隆及其原核表达
- 2016年
- 以玉米自交系吉818和富含蛋氨酸（Met）的BSSS53为材料,克隆编码超高蛋氨酸18k Dδ-醇溶蛋白（18kD δ-zein）的dzs18基因,并进行原核表达。结果表明,BSSS53中分离的目标DNA序列,其ORF内有8个碱基替换突变,第208个碱基C发生缺失,导致移码突变、产生截短的多肽链。从吉818中分离的目标DNA长度为741 bp,含有由648 bp构成的ORF,编码由215个氨基酸组成的超高蛋氨酸吉818-18kD-δ-zein。与参考序列相比,目标DNA序列中存在29个碱基替换突变、15个碱基的片段插入和3个碱基的片段缺失。吉818-18kD-δ-zein中Met残基数占27.9%,是10kDδ-zein的2倍,且比参考蛋白多20%,其中部蛋氨酸高密区（HMQR）内Met残基数占50.0%。玉米dzs18在原核细胞中的表达受菌株的影响,在大肠杆菌BL21（DE3）中不表达,在Rossetta（DE3）中正常表达。ITPG浓度在0.1-1.5 mmol/L范围内对目标蛋白的表达量没有明显影响;在1-5 h范围内,目标蛋白量随诱导时间的延长而增加,超过6 h,增加不明显。玉米dzs18基因在Rossetta（DE3）中表达的目标蛋白以包涵体即不溶性蛋白质颗粒形式存在。
- 李鹏宫赫阳王振萍吴委林康泽然郑大浩
- 关键词：玉米原核表达包涵体
- 玉米高蛋氨酸蛋白基因dzs18的克隆及其原核表达载体构建被引量：3
- 2015年
- 为将玉米高蛋氨酸蛋白基因在原核细胞中加以表达、培育高蛋氨酸水平的益生菌并用于提高动物饲料的蛋氨酸含量,本研究采用PCR克隆的方法,从玉米自交系B73中克隆出目的基因dzs18。结果表明:目标DNA序列长度729bp;目的基因编码由211个氨基酸组成的富含蛋氨酸的18kDδ-zein,其蛋氨酸残基数(50)占总氨基酸数量的23.7%。该蛋白质氨基酸序列的中部,即第75个氨基酸到第167个氨基酸之间,存在1个由93个氨基酸序列构成的蛋氨酸高密区,蛋氨酸残基数(41)所占比率为44.1%。利用所克隆的B73-dzs18,成功构建出dzs18基因的原核表达载体pGEX4T1-dzs18;目的基因正确插入到载体中GST标签基因的下游;序列测定证明,目的基因dzs18与GST标签基因构成具有无移码突变、连读阅读的GST-dzs18融合基因。
- 宫赫阳李鹏吴委林康泽然王延禹郑大浩
- 关键词：玉米原核表达载体
