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绵羊肺炎支原体免疫组织化学及间接免疫荧光检测方法的建立被引量：8: 2017年; 以病理组织学观察为基础,建立检测绵羊肺炎支原体的间接免疫组织化学和间接免疫荧光方法,以绵羊肺炎支原体标准血清为一抗,分别以家兔抗山羊Ig G-HRP和家兔抗山羊Ig G-FITC为二抗,对绵羊肺炎支原体阳性肺组织切片及阴性对照组切片进行HE染色、免疫组织化学染色及间接免疫荧光染色,并优化染色条件,以确保组织切片在最佳的条件下进行鉴定。结果显示,本试验所建立的免疫组织化学方法与PCR方法对病样的检出率相符,且高于传统的分离培养法。结果表明,本试验建立的间接免疫组织化学方法和间接免疫荧光方法可用于对临床病例的组织样本检测,具有很强的特异性和可靠性,可直观地观察和探究该病原在机体内的定位、动态分布以及致病机理,以期为临床诊断提供更可靠的方法。; 张建华黄海碧王晓晖白帆史晓娜高媛王力强侯丽娜郝永清; 关键词：绵羊肺炎支原体免疫荧光免疫组织化学

IBRV gD蛋白的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立被引量：5: 2019年; 利用生物学软件分析牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gD蛋白的抗原决定簇,发现相应的核酸序列,设计特异性引物用PCR扩增IBRVgD基因片段并克隆到原核表达载体pET-32a中,通过双酶切鉴定正确和测序正确后进行诱导表达。利用间接ELISA方法和Western blot鉴定gD重组蛋白的免疫原性和反应原性。最后将gD重组蛋白用作包被抗原,并通过优化相应的反应条件建立检测IBRV抗体的间接ELISA方法。结果显示,表达的gD重组蛋白具有良好的免疫原性和反应原性,间接ELISA阴阳性临界值为:D450nm值=0.23。重组抗原gD与口蹄疫、牛病毒性腹泻、赤羽病、副结核病、布鲁菌病、结核病等阳性血清无交叉反应,具有比较好的特异性。组内和组间变异系数均小于5%,重复性较好。建立的ELISA方法结果显示,当测试相同的200个临床血清样本时,与IDEXX牛传染性鼻气管炎病毒gB X3抗体检测试剂盒相比,两者符合率为96%。本试验为IBRV抗体间接ELISA检测试剂盒的开发奠定了基础。; 魏鑫张建华郭婷吕天星周雅坪张新竹吴倩陈新迪王艳芳白帆郝永清; 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒原核表达 ELISA

绵羊肺炎支原体及其脂质相关膜蛋白诱导绵羊肺泡巨噬细胞IL-1β表达的分子机制被引量：3: 2020年; 为证明TLR2是否参与绵羊肺炎支原体(Mo)或LAMPs刺激肺泡巨噬细胞时细胞因子的表达,使用Mo或LAMPs刺激绵羊肺泡巨噬细胞后,利用荧光定量PCR、流式细胞术、Western blot以及ELISA等方法分别对TLR2转录和翻译水平、MAPK信号通路激活情况和IL-1β分泌情况进行检测。同时,使用TLR2抑制抗体及MAPK抑制剂后,利用荧光定量PCR、Western blot以及ELISA检测MAPK信号通路激活情况和IL-1β分泌情况。结果显示,绵羊肺泡巨噬细胞受Mo或LAMPs刺激后,TLR2在基因和蛋白表达水平均有不同程度上升,MAPK信号通路中各信号蛋白均发生磷酸化反应,IL-1β在基因和蛋白表达水平均有不同程度上升。对TLR2及MAPK功能抑制后,MAPK信号通路的激活及IL-1β的表达均受到明显抑制。结果提示,Mo及其LAMPs可通过绵羊肺泡巨噬细胞的TLR2受体激活MAPK信号通路,继而引起细胞因子IL-1β的分泌增多。; 白帆吴金迪王晓晖王晓晖吕天星郝永清; 关键词：绵羊肺炎支原体脂质相关膜蛋白丝裂原活化蛋白激酶 TOLL样受体2 IL-1Β

绵羊肺炎支原体p60蛋白N端与C端的表达及其免疫学特性研究被引量：5: 2017年; 为分析绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)膜表面脂蛋白p60的免疫学特性,本研究分别扩增p60蛋白N端与C端的基因,并通过重叠延伸PCR将C端基因序列中的TGA(1 459-1 461bp)定点突变为同义密码子TGG。将扩增的基因片段分别插入到pET-32a(+)表达载体上,重组质粒分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,得到分子质量约57ku的p60-N蛋白和分子质量约为30.5ku的p60-C蛋白;再对纯化后的重组蛋白进行Western blotting分析,结果表明重组蛋白均可与MO阳性血清发生特异性免疫学反应,表明表达的重组蛋白p60-N和p60-C均有良好的反应原性。本研究为筛选MO主要的免疫原性蛋白和建立特异的血清学诊断方法提供了依据。; 麻昌姣郑佳琪黄海碧王晓晖白帆郝永清; 关键词：绵羊肺炎支原体

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白帆