徐悦
- 作品数：20 被引量：25H指数：2
- 供职机构：江苏省农业科学院更多>>
- 发文基金：江苏省农业科技自主创新基金公益性行业(农业)科研专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 伪狂犬病毒感染对BHK-21悬浮细胞内质网应激和未折叠蛋白反应的影响
- 2022年
- 【目的】探讨伪狂犬病毒(PRV)感染对BHK-21悬浮细胞内质网应激及未折叠蛋白反应(UPR)的影响。【方法】将悬浮的乳仓鼠肾细胞(BHK-21)以感染复数(MOI)0.01接种PRV,分别在接毒后12、24、36、48和56 h取样,用CCK-8法检测细胞存活率,按Reed-Muench法检测病毒滴度,筛选病毒接种处理的合适时间;以不接毒细胞作对照组,分别在感染后12、24、36和48 h取样,用实时荧光定量PCR法检测内质网应激标志分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及UPR的3种感受蛋白(PERK、IRE1、ATF6)相关通路中基因的表达变化,Western blotting法检测相关蛋白的表达变化。在接种PRV同时分别加入0、0.001、0.005、0.01和0.02μmol/L内质网应激诱导剂毒胡萝卜素(Tg)和0、20、40、80和160μmol/L内质网应激抑制剂牛磺熊去氧胆酸(TUDCA),48 h收集细胞测定病毒滴度和细胞存活率。【结果】PRV感染56 h细胞存活率低于70%,感染48 h时病毒滴度达到最高(8.1 lg TCID/mL),因此后续试验分别在接毒后12、24、36和48 h取样。与对照组相比,PRV感染36和48 h GRP78转录水平均极显著升高(P<0.01);PERK通路中,转录激活因子4(ATF4)转录水平在PRV感染36、48 h均极显著升高(P<0.01),生长抑制DNA损伤基因34(GADD34)转录水平在PRV感染36 h显著升高(P<0.05)、48 h极显著升高(P<0.01),磷酸化真核翻译起始因子(P-eIF2α)蛋白水平在PRV感染36、48 h均极显著升高(P<0.01);IRE1通路中,PRV感染组细胞36 h后多以剪切形式sXBP1存在,同时下游p58mRNA水平在36 h显著增加(P<0.05),p58和EDEM mRNA水平在48 h均极显著增加(P<0.01);ATF6通路中,PRV感染不同时间ERp57、PDI、Calnexin和Calreticulin的表达均无显著变化(P>0.05)。与0μmol/L组相比,0.01和0.02μmol/L Tg极显著降低细胞存活率(P<0.01),0.005和0.01μmol/L Tg均极显著增加了PRV病毒滴度(P<0.01)。【结论】PRV感染可以诱导BHK-21悬浮细胞内质网应激,激活UPR的PERK和IRE1信号通路,说明PRV利用内质网
- 陈丽倪敏舒徐悦徐悦鲍熹冯磊冯磊
- 关键词：伪狂犬病毒内质网应激未折叠蛋白反应
- 内质网分子伴侣GRP94对伪狂犬病毒增殖的调节作用被引量：1
- 2022年
- 为探究葡萄糖调节蛋白94(GRP94)对伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)增殖的影响,以及GRP94与PRV结构蛋白之间的相互作用。利用慢病毒转染构建GRP 94基因过表达的BHK-21细胞,以及CRISPR/Cas9技术构建GRP 94基因敲除的BHK-21细胞,检测PRV感染不同细胞的增殖水平,比较内质网应激相关蛋白表达水平,探索GRP94与PRV结构蛋白之间的互作关系。结果表明,GRP 94基因过表达细胞株显著有利于PRV增殖,而GRP 94基因缺失细胞株对PRV增殖无显著影响。蛋白免疫印迹结果显示,在GRP 94基因缺失细胞株中,GRP78表达水平显著上调。免疫共沉淀结果表明,GRP94与gB、gD、gL具有相互作用。GRP 94基因过表达有利于PRV增殖,检测未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)相关蛋白,研究GRP94在病毒增殖过程中的具体作用,可为PRV与内质网应激提供分子方面的研究基础,于对抗PRV病毒的感染具有重要意义。
- 倪敏舒陈丽鲍熹鲍熹庄腾寒徐悦
- 关键词：葡萄糖调节蛋白94葡萄糖调节蛋白78伪狂犬病毒
- 伪狂犬病毒在BHK-21悬浮细胞中的增殖特性被引量：1
- 2022年
- 为考察BHK-21悬浮细胞增殖伪狂犬病毒(Pseudorabies virus, PRV)工艺参数及病毒增殖过程中代谢动力学,将PRV接种于BHK-21悬浮细胞,考察接毒时细胞密度、病毒感染复数(MOI)及收毒时间对病毒效价的影响,测定培养过程中葡萄糖(Gluc)、乳酸(Lac)和谷氨酰胺(Gln)浓度,计算病毒增殖过程中各参数代谢速率。结果显示,将MOI为0.01的PRV病毒接种BHK-21悬浮细胞,其病毒滴度在42 h达最高8.5 lgTCID;/mL。代谢参数检测结果表明,BHK-21细胞在接毒36 h后细胞开始出现死亡。PRV在BHK-21悬浮细胞中的增殖特性为伪狂犬病毒的规模化培养及疫苗开发提供了技术基础。
- 陈丽倪敏舒徐悦徐悦鲍熹冯磊冯磊
- 关键词：BHK-21细胞伪狂犬病毒
- 一种制备细菌纳米抗原的方法及其应用
- 本发明提供一种制备细菌纳米抗原的方法及其应用，涉及到生物制品领域。该制备细菌纳米抗原的方法，包括将所述细菌和金刚砂同时进行超声破碎的步骤。本发明还提供含有所述细菌纳米抗原和含有所述金黄色葡萄球菌ATCC29213纳米抗原...
- 马芳周明旭张金秋邓碧华徐悦卢宇侯继波
- 文献传递
- 一株幼地仓鼠肾细胞低免疫力细胞株及其构建方法和应用
- 本发明涉及生物技术领域，特别是涉及生物医学技术领域，更为具体的说是涉及一株幼地仓鼠肾细胞低免疫力细胞株及其构建方法和应用。本发明公开的幼地仓鼠肾细胞株BHK21‑IRF3‑KO‑Sus，该细胞株于2020年7月16日保藏...
- 陈丽冯磊鲍熹徐悦恽君雯
- 江苏某牛场奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定、耐药性及保守抗原分析被引量：18
- 2019年
- 2018年6月对江苏某奶牛场30头隐性乳房炎奶牛的50个发病乳区采集生牛乳进行检测,分离鉴定主要病原菌,其中大肠埃希菌19株(38%)、肺炎克雷伯菌13株(26%)、金黄色葡萄球菌5株(10%)、凝固酶阴性葡萄球菌11株(22%)、无乳链球菌4株(8%)、停乳链球菌1株(2%)。采用PCR和血清学方法对金黄色葡萄球菌分离株进行分型,结果显示5株金黄色葡萄球菌中4株为CP8型(80%),1株为非CP5、CP8或336PS型。耐药性分析结果显示该牛场松鼠葡萄球菌菌株对磺胺类药物复方新诺明和广谱抗菌药甲氧胺嘧啶表现双重耐药,耐药率达100%;肺炎克雷伯菌对利福平和万古霉素表现双重耐药,耐药率达100%。此外,部分葡萄球菌、链球菌、肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌对四环素、红霉素、克林霉素和克拉霉素表现出中度敏感。但所有菌株对头孢哌酮、链霉素、庆大霉素、妥布霉素、氯霉素和呋喃妥因表现高度敏感,敏感率100%。通过PCR方法检测发现,在分离菌株中金黄色葡萄球菌TraP和FnbpA,无乳链球菌GapC和Sip,大肠埃希菌Lpf1A等保守抗原检出率高达89%~100%,证明其作为亚单位疫苗候选抗原的普适性。这一研究为该牛场乳房炎的临床用药和综合防控提供了参考依据。
- 周明旭周明旭徐悦徐悦鲍熹张金秋杨章平朱国强
- 关键词：奶牛乳房炎耐药性
- 苏北地区某奶牛场乳房炎顽固病原菌的分离鉴定及耐药性分析被引量：4
- 2020年
- 从江苏北部某牛场共采集26头经四环素治疗1周的患乳房炎奶牛的奶样31份,从生牛乳中分离鉴定出病原菌12株,其中大肠杆菌3株,肺炎克雷伯菌2株,停乳链球菌、鲍曼不动杆菌、肠球菌、松鼠葡萄球菌、产色葡萄球菌、短小芽孢杆菌和铜绿假单胞菌各1株。药敏试验结果显示:3株大肠杆菌和2株肺炎克雷伯菌对青霉素、氨苄西林和林可霉素均显示出多重耐药性;铜绿假单胞菌菌株W9对青霉素、氨苄西林、林可霉素、四环素、土霉素和头孢喹肟均表现出多重耐药;产色葡萄球菌菌株W12对林可霉素、四环素和土霉素多重耐药;松鼠葡萄球菌菌株W11对林可霉素、链霉素、卡那霉素、四环素、土霉素、庆大霉素和头孢喹肟均耐药。在9种常用的兽用抗生素中,12株分离菌对林可霉素的耐药率最高,达到83.3%(10/12);对卡那霉素和庆大霉素的耐药率最低,均仅为8.3%(1/12)。
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- 关键词：奶牛乳房炎病原菌耐药性
- 产低毒性脂多糖大肠杆菌J5基因重组株的构建被引量：1
- 2020年
- 细菌脂多糖(LPS)对宿主细胞具有一定的毒性,但经修饰后的单磷酸类脂A(MPLA)却是一种无毒性的高效免疫佐剂。选择天然O抗原不完全的大肠杆菌J5疫苗株为出发菌株,利用λ-Red同源重组技术导入外源弗朗西斯菌(Francisella novicida)lpxE基因,缺失大肠杆菌lpxM基因。结果显示,J5ΔlacI::lpxEΔlpxM基因重组株的LPS鲎试剂活性较DH5α和J5原菌显著降低;对4周龄的ICR小鼠腹腔注射LPS提取物,重组菌和PBS组的小鼠体征及肝脏切片均正常。同时,腹腔注射大肠杆菌J5和DH5α的小鼠被毛凌乱、精神抑郁、肝脏细胞肿大,发生炎性浸润,有明显的毒性反应。以上结果说明,J5重组菌的LPS已经区别于原菌,是低毒性的MPLA产物。上述重组株的成功构建,能为生产廉价的兽用MPLA免疫佐剂奠定工作基础。
- 徐悦周明旭朱纯尹文竹马芳鲍熹张金秋卢宇
- 关键词：大肠杆菌RED同源重组佐剂细菌脂多糖
- 一种肠出血性大肠埃希菌O157:H7检测试剂盒及其应用
- 本发明提供一种肠出血性大肠埃希菌O157:H7检测试剂盒，试剂盒包括两组引物，第一组引物用于检测O157:H7与O55:H7菌株独有的<I>lpf2C</I>基因，上、下游引物如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO...
- 周明旭卢宇徐悦马芳鲍熹尹文竹张金秋邓碧华吕芳
- 文献传递
- 一种提高细菌外膜囊泡产量的方法及其应用
- 本发明提供一种提高细菌外膜囊泡产量的方法及其应用，属于生物技术领域。该方法，包括培养敲除了<I>yjeE</I>基因的革兰氏阴性细菌突变株的步骤。本发明还提供所述方法制备的细菌外膜囊泡在制备疫苗和免疫增强剂中的应用。采用...
- 周明旭张金秋邓碧华马芳徐悦卢宇侯继波
