贺丽
- 作品数：2 被引量：5H指数：2
- 供职机构：扬州大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省基础研究计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 大肠杆菌菌影制备及介导pEGFP-N1在RAW264.7细胞中表达被引量：3
- 2014年
- 通过PCR扩增噬菌体PhiX174裂解基因E,并将其插入到温控表达载体pBV220中,构建重组温控表达质粒pBV220-E。将重组质粒pBV220-E转化至大肠杆菌DH5α中,升温到42℃诱导E基因的表达。将真核表达质粒pEGFP-N1与大肠杆菌菌影孵育后转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,荧光显微镜观察pEGFP-N1的表达情况。结果表明:扩增的E基因全长为276bp,与GenBank公布的基因序列一致。电镜观察结果显示,细菌表面出现跨膜孔道,细菌内容物经孔道排出形成空壳。荧光显微镜观察结果显示,大肠杆菌菌影介导的pEGFP-N1在小鼠巨噬细胞中获得表达。为进一步研究以细菌菌影为基础的新型灭活疫苗和载体疫苗提供参考依据。
- 焦红梅贺丽杨慧李国才陈红菊严华戴华季明春
- 关键词：转染
- E.coli M15碱性磷酸酶的表达、纯化及活性分析被引量：2
- 2012年
- 目的:克隆、表达并纯化大肠杆菌M15碱性磷酸酶(EAP)成熟肽(phoA),分析其活性。方法:采用PCR技术从M15基因组DNA中扩增出phoA编码基因;构建其原核表达载体pCold-TF-EAP;转入E.coli BL21(DE3)进行表达;IMAC Ni-NTA柱层析法纯化重组蛋白;重组蛋白与底物对硝基苯磷酸二钠显色反应分析其活性。结果:克隆得到了序列约1 400 bp phoA编码基因,原核表达了分子量约为100 kDa的融合重组EAP(rEAP),纯化获得的rEAP具有催化磷酸单酯的活性,有效反应温度范围大,在27℃～67℃都具有较高的催化活性,在pH 7.5～8.0间催化活性最高。结论:克隆了可正确表达EAP的phoA编码基因,为EAP的工业化生产及应用提供了生物材料。
- 杜庆辉贺丽刘双喜张莉君冒艳丽朱小平焦红梅李国才
- 关键词：碱性磷酸酶活性鉴定
