陈秀芳
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 供职机构：金坛市畜牧兽医站更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金长江学者和创新团队发展计划国家自然科学基金更多>>
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- 大肠杆菌16SrRNA甲基化酶基因rmtB缺失株的构建及其耐药性分析被引量：1
- 2015年
- 为探索大肠杆菌(E.coli)16S r RNA甲基化酶耐药基因rmt B在菌体形成氨基糖苷类抗生素抗性中的作用,本研究以rmt B阳性菌E.coli 3A11-16作为亲本株,经PCR扩增其上下游序列作同源臂序列,分别克隆于p BluescriptⅡKS+中,构建p Blue-Δrmt B,其rmt B基因中缺失的30 bp由质粒中多克隆位点的18 bp替换,以XbaⅠ/KpnⅠ酶切p Blue-Δrmt B,目的片段亚克隆于自杀性载体p DMS197中,构建p DMS-Δrmt B,电转化至野生菌E.coli3A11-16,筛选获得rmt B基因缺失株E.coli 3A11-16Δrmt B。同时将rmt B基因插入p BR322中转化于基因缺失株构建其回补株。微量稀释法分别测定rmt B亲本株、基因缺失株和回补株对氨基糖苷类抗生素的耐药性。PCR和测序结果显示rmt B基因缺失株构建正确,证明通过自杀性载体能够对质粒中的基因进行改造。药敏试验显示相对于亲本株,基因缺失株对4,6-二脱氧链霉胺类氨基糖苷抗生素耐药性降低至质控菌水平,表明16S r RNA甲基化酶rmt B基因是介导大肠杆菌对4,6-二脱氧链霉胺类氨基糖苷类抗生素高度耐药的重要基因。本实验通过构建rmt B基因缺失株,为进一步研究rmt B阳性菌生物学功能及其在E.coli中的耐药机制奠定了基础。
- 区炳明陈琳宋玉洁王小舟张倩陈秀芳朱国强
- 关键词：氨基糖苷类
