公共文化服务平台

华敏: 作品数：19 被引量：25H指数：3; 供职机构：贵州大学动物科学学院更多>>; 发文基金：贵州省科技创新人才团队建设项目国家自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生化学工程更多>>

合作作者

三穗麻鸭SOCS1基因克隆及序列分析: 2018年; 为了分析三穗麻鸭细胞因子信号传导抑制蛋白(suppressors of cytokine signaling,SOCS)基因分子特征,预测其编码蛋白的生物学功能,本试验对三穗麻鸭SOCS1基因进行PCR扩增、克隆及序列测定,应用生物信息学方法对三穗麻鸭SOCS1基因进行序列分析,并对其编码蛋白的二级结构、保守结构域、跨膜结构域、信号肽和三级结构进行预测。结果显示,三穗麻鸭SOCS1基因全长为624bp,可编码207个氨基酸;与大雁、原鸡、非洲爪蟾、猪、牛、人、大鼠和草鱼相应序列核苷酸序列同源性分别为97.6%、92.6%、68.3%、65.0%、64.8%、64.5%、63.5%和58.2%,氨基酸序列同源性分别为99.5%、96.6%、69.2%、64.0%、64.0%、67.9%、65.4%和50.8%;系统进化树显示,三穗麻鸭与大雁亲缘关系最近;编码蛋白的二级结构由无规则卷曲、α-螺旋、β-转角和延伸链组成,具有一个中央SH2区和SOCS盒,且无跨膜区和信号肽区域;三级结构呈弯曲螺旋结构。本试验结果为三穗麻鸭SOCS1基因编码蛋白的生物学功能研究奠定了理论基础。; 龙立书华敏万润欧德渊苟万里文明; 关键词：编码蛋白分子特征

H6N6亚型禽流感病毒N6基因的原核表达与多克隆抗体制备被引量：4: 2018年; 为表达H6N6亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)神经氨酸酶(NA)蛋白,并制备多克隆抗体,本试验根据GenBank中AIV N6基因序列(登录号:MG434500)设计特异性引物,对贵州地区分离的H6N6亚型AIV贵州株进行N6基因PCR扩增,将其克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组原核表达载体pET-32a-N6,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达His-N6重组蛋白,将诱导产物超声破碎离心后,利用镍柱对重组蛋白进行纯化,并利用SDS-PAGE和Western blotting对表达蛋白进行双重鉴定,将纯化后的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并通过间接ELISA检测其效价。结果显示,AIV贵州株N6基因编码区长1 380bp,可编码459个氨基酸,其中175-207bp缺失33个核苷酸;重组质粒pET-32a-N6经双酶切鉴定分别获得大小为5 900bp左右的载体条带和1 380bp左右的目的基因条带,成功构建了pET-32a-N6重组质粒;蛋白超声破碎后经SDS-PAGE发现,重组蛋白主要存在于沉淀中,以包涵体形式存在,蛋白分子质量约为70ku,与预期结果一致;纯化后的重组蛋白经SDS-PAGE和Western blotting双重鉴定,均在70ku处出现条带,说明纯化的蛋白为重组蛋白pET-32a-N6,表达产物具有免疫学活性,包涵体经变性、复性处理,重组表达蛋白分别被His抗体和兔源抗N6多克隆抗体所识别。间接ELISA检测其效价高于1∶3 200。以上结果表明,试验成功克隆、表达了H6N6亚型AIV的N6基因,所制备的N6蛋白多克隆抗体具有良好的免疫活性,能被His抗体和兔源抗N6多克隆抗体所识别。; 万润华敏龙立书贺欣薇罗引幸周碧君王开功程振涛程振涛; 关键词：原核表达多克隆抗体

三穗麻鸭Cofilin2基因序列分析及其组织表达研究: 2018年; 为探究三穗麻鸭丝切蛋白2(Cofilin2)基因特征及其在鸭组织中的表达规律,试验根据GenBank中鸡Cofilin2基因序列设计特异性引物,利用RT-PCR方法扩增获得目的基因,利用生物信息学软件分析三穗麻鸭Cofilin2基因特征,实时荧光定量PCR方法检测Cofilin2基因在三穗麻鸭不同组织中的表达情况。结果显示,三穗麻鸭Cofilin2基因编码区大小为498bp,可编码166个氨基酸;三穗麻鸭Cofilin2基因序列与鸡、猕猴、牛、小鼠、安大略鲑、人和猪相应序列的同源性分别为94.4%、91.6%、91.6%、87.6%、77.7%、70.5%和69.5%;系统进化树显示,Cofilin2基因在不同物种进化过程中高度保守;Cofilin2基因编码蛋白的二级结构由α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲组成,三级结构呈弯曲螺旋结构;实时荧光定量PCR检测显示,三穗麻鸭Cofilin2基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑、胸腺、十二指肠、腿肌和法氏囊等组织器官中均有不同程度表达,其中心脏中表达量最高,法氏囊中表达量最低。本试验结果为三穗麻鸭抗病分子机理研究奠定了基础。; 华敏贺欣薇万润程振涛程振涛周碧君; 关键词：三穗鸭克隆实时荧光定量PCR

三穗麻鸭JAK2基因克隆与序列分析研究: 2018年; 为了解三穗鸭JAK2基因特征,采用分段PCR方法获取三穗麻鸭JAK2基因并进行克隆与测序,应用生物信息学相关软件进行基因分子特征分析。结果:三穗麻鸭JAK2基因全长3 393 bp,可编码1 131个氨基酸;与原鸡的核苷酸序列同源性达94.5%,氨基酸同源性达97.6%;进化树分析显示,该基因与鸡属动物亲缘关系最近。; 张美兰张宇邹作成田芳张飘龙立书华敏程振涛周碧君文明; 关键词：JAK

基于RNA-Seq筛选鸭肠炎病毒感染鸭脾差异表达免疫相关基因被引量：8: 2017年; 为挖掘鸭肠炎病毒(duck enteritis virus,DEV)感染鸭的差异表达免疫相关基因,本研究以DEV GZ株经腿部肌肉接种50d鸭后,于接种后66、90和114h采集鸭脾组织样本,提取总RNA,通过高通量RNA-seq技术测序,应用GO和KEGG数据库进行比对注释,并采用荧光定量PCR对部分差异表达基因进行验证,结果显示:DEV接种66h时鸭脾的差异表达基因有511个,参与免疫相关生物学过程的为70个,其中上调基因46个,下调基因24个;90h时差异表达基因有485个,参与免疫相关生物学过程的为64个,其中上调基因49个,下调基因15个;114h时差异表达基因有531个,参与免疫相关生物学过程的为66个,其中上调基因35个,下调基因31个。GO数据库分析显示,差异表达免疫相关基因主要涉及细胞黏附、抗原加工和呈递、补体激活等免疫反应过程;KEGG数据库分析显示,差异表达免疫相关基因主要富集在细胞黏附分子、ECM受体互作、PPAR等信号通路;荧光定量PCR对7个差异表达基因进行检测显示,差异表达基因相对表达量与RNA-Seq技术测序结果基本一致。这些结果为进一步阐明DEV感染机制和机体免疫应答机制奠定了基础。; 吴良涛郑敏华敏万润程振涛周碧君文明; 关键词：鸭肠炎病毒免疫相关基因

一株鸭源木糖葡萄球菌的分离鉴定: 引言木糖葡萄球菌（Staphylococcus xylose,S.xylose）是一种广泛分布于自然环境中的血浆凝固酶阴性葡萄球菌（Coagulase negative staphylococcus,CNS）。在过去常认...; 万润杨琦华敏吴良涛郑敏文明; 关键词：木糖葡萄球菌

某蛋鸡场禽流感与新城疫卵黄抗体效价检测分析: 华敏杨琦万润郑敏吴良涛文明

鸭源H6N6亚型禽流感病毒贵州株NA基因序列分析: 2018年; 为了解H6N6亚型禽流感病毒贵州株N6基因生物学特性,根据GenBank上禽流感病毒N6基因序列设计特异性引物,对贵州地区分离的H6N6亚型禽流感病毒贵州株进行N6基因RT-PCR扩增与克隆测序分析,结果显示,4株H6N6亚型禽流感病毒贵州株N6基因编码区均为1 380bp,可编码459个氨基酸,其中从第175-207位缺失33个核苷酸,即编码蛋白颈部存在11个氨基酸缺失(TNSTTTIINNN);4株H6N6亚型禽流感病毒贵州株N6基因核苷酸同源性为96.0%～99.1%,其中A/duck/Guizhou/01/2017(H6N6)与A/duck/Guizhou/02/2017(H6N6)为同一支,A/duck/Guizhou/03/2017(H6N6)和A/duck/Guizhou/04/2017(H6N6)为另一同支;N6亚型毒株与其他非N6亚型毒株明显位于2个分支上。这些结果为贵州省禽流感分子流行病学研究提供了基础资料。; 万润华敏龙立书贺欣薇张明洋周碧君王开功程振涛程振涛; 关键词：禽流感病毒基因克隆

一株鸭源木糖葡萄球菌的分离鉴定: 万润杨琦华敏吴良涛郑敏文明

灰天鹅致病性大肠杆菌分离鉴定: 引言近年来,大肠杆菌病的爆发有频繁的报道,尤其在大型的养殖场上,大肠杆菌更是肆无忌惮,表现得最为突出,尤其感染或与其他细菌混合感染引起的各种疾病更是让人烦恼.它具有很多种血清型,其中肠产毒性大肠杆菌(Escherichi...; 华敏万润龙立书贺欣薇罗引幸张明洋文明

华敏

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

华敏

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈