李华
- 作品数：2 被引量：25H指数：2
- 供职机构：江苏省农业科学院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金引进国际先进农业科技计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学环境科学与工程更多>>
- 脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)人工抗原及多克隆抗体的研制被引量：7
- 2008年
- 脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxyn ivalenol,DON)是一种半抗原,没有免疫原性。为了制备抗DON的抗体,必须对其进行结构修饰,加大DON的分子量。本研究采用保护-去保护策略使DON的C3上的羟基与琥珀酸酐反应,使DON衍生后获得1个羧基。利用薄层色谱法跟踪反应进程,反应产物采用薄层色谱法纯化,高效液相色谱和电喷雾离子化质谱(ESI-MS)分析,得出[M+H]+为397.2,确认为3-半琥珀酰-脱氧雪腐镰刀菌烯醇(3-HS-DON)。3-HS-DON与载体蛋白采用碳化二亚胺法进行偶联,偶联物经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,推断偶联成功,并研制出多克隆抗体。
- 祭芳李华陈怀谷徐剑宏陆琼娴史建荣
- 关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇结构修饰
- 赤霉毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)酶联免疫检测方法研究被引量：18
- 2007年
- 【目的】建立快速、灵敏、有效的毒素检测方法,以保证麦类作物的安全生产以及谷物食品的安全性。【方法】以主要赤霉病菌毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)为对象,利用半琥珀酰化脱氧雪腐镰刀菌烯醇的牛血清蛋白偶联物(3-HS-DON-BSA)作免疫原,分别采用腹膜腔注射法和颈、背部多点注射法免疫Balb/c小鼠和豚鼠,获得DON的多抗血清,建立间接ELISA检测方法。【结果】多抗豚鼠血清的效价达到1∶6400,而小鼠混合血清的效价则为1∶12800。引起DON抗体最大结合50%抑制时,所需DON及其类似物3-Ac-DON和T-2毒素的量分别为63μg·ml-1、114μg·ml-1和>1000μg·ml-1;相对交叉反应率分别为100%,55.2%和6.3%。包被抗原的最适工作浓度为1/1500,小鼠血清工作浓度为1/1600。在包被原和小鼠血清的最适工作浓度下,20%以上的甲醇稀释度对DON免疫分析有显著的影响,低于10%浓度的甲醇对DON免疫分析基本无影响。建立的间接竞争ELISA法检测范围为0.01～100μg·ml-1,检出限为0.02μg·ml-1,平均回收率为82%～93%,精密度(CV%)为4.65%～21.3%。【结论】本文提出的毒素检测方法,检测成本低,方便易行,不仅可以应用于小麦赤霉病的病理学研究,也可广泛应用于谷物及其制成品中DON毒素的含量检测,具有较好的应用价值。
- 李华祭芳徐剑宏王裕中史建荣
- 关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫学检测ELISA小麦赤霉病
