丛文娟
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：华中师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 轮状病毒WH-2株vp7基因的原核表达及单克隆抗体的制备被引量：2
- 2011年
- 目的:制备人B组轮状病毒WH-2株vp7基因的单克隆抗体(mAb),并研究其免疫学特性。方法:将B组轮状病毒WH-2株vp7基因克隆至pGEX-KG载体,然后转入大肠杆菌E.coliTop10,IPTG诱导表达GST-VP7融合蛋白。分离纯化蛋白GST-VP7并免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合,利用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,有限稀释法克隆化,获得稳定分泌mAb检测为阳性的细胞株。结果:经过3次克隆化筛选,最终得到1株能和GST-VP7蛋白反应稳定分泌mAb的阳性细胞克隆,这些mAb通过Western blot鉴定结果显示其具有良好的特异性。结论:人B组轮状病毒WH-2株VP7蛋白成功在大肠杆菌中GST融合表达及mAb的制备体能用于GBRV结构和功能的研究,也为其引起的疾病预防、诊断和治疗等研究和临床诊断奠定了基础。
- 丛文娟杨继红邓妍陈凯峰郭建军熊国梅刘中来
- 关键词：VP7基因单克隆抗体
- GST-Dot4融合蛋白的表达·纯化及鉴定
- 2009年
- [目的]为了提高Dot4蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达并获得较高纯度的蛋白。[方法]以pGEX-KG-Dot4重组质粒转化E.coliBL21后,用IPTG诱导重组菌表达GST-Dot4融合蛋白,采用SDS-PAGE及W estern B lot法鉴定表达产物,用G lutathione Sepharose4B亲和层析柱分离纯化。[结果]pGEX-KG-Dot4重组表达载体在大肠杆菌中获得高效表达;经G lutathione Sepharose4B亲和层析柱纯化获得了高纯度的Dot4融合蛋白;W estern B lot表明,该蛋白可与GST标签抗体反应,表明获得了目的蛋白。[结论]在大肠杆菌中表达纯化后得到较高纯度的GST-Dot4融合蛋白,为Dot4蛋白的结构、功能及作用机制研究奠定了基础。
- 张艳梅丛文娟郭建军刘中来
- 关键词：融合蛋白可溶性表达蛋白纯化
