宫晓华
- 作品数：12 被引量：51H指数：5
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项上海市科技兴农重点攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 一株犬瘟热病毒变异株的基因组特征
- 引言犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)隶属于副黏病毒科麻疹病毒属,是单股负链RNA病毒。传染性极强,发病率和致死率都很高。发病率可达100%,死亡率也高达80%,宿主主要包括犬科、猫科、鼬...
- 刘柱李丹丹李琦宫晓华缪秋红李传峰陈宗艳张淼涛刘光清
- 文献传递
- 鸭坦布苏病毒E蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：1
- 2016年
- 目的用RT-PCR技术扩增鸭坦布苏病毒(DTMUV)AH-F10株E基因,并克隆至pET32a(+)载体,构建重组表达质粒pET32a-E,表达E蛋白。方法重组表达质粒转化感受态细胞BL21(DE3),经IPTG诱导后,获得含6个His标签的融合蛋白,大小约54kDa。表达的蛋白以包涵体形式存在。对目的蛋白进行纯化,用纯化的E蛋白免疫Balb/c小鼠,制备多克隆抗体血清。结果SDS-PAGE和Western blot试验结果表明E基因在大肠埃希菌中成功表达,并能与抗DTMUV多克隆抗体产生特异性反应,具有良好的反应原性。间接免疫荧光试验表明免疫小鼠后获得的多克隆抗体能与DTMUV反应。结论本研究为DTMUV新型疫苗和诊断试剂盒的进一步研究奠定了基础。
- 王勇殷冬冬宫晓华王瑞许漩唐井玉兰梦蝶王桂军
- 关键词：E蛋白原核表达多克隆抗体
- 小反刍兽疫病毒FY株全基因组序列的测定及其分子特征的研究被引量：2
- 2017年
- 根据小反刍兽疫病毒(PPRV)参考序列设计了11对特异性引物,然后用RT-PCR方法分段扩增出PPRV富阳分离株(PPRV-FY)的全基因组序列,用DNAstar软件和Mega软件对PPRV-FY株及参考毒株的基因序列进行了比对和分析,并根据N基因核苷酸序列绘制了系统进化树。结果,PPRV-FY株全长15 948 bp,编码6种结构蛋白(N、P、L、M、F和H),2种非结构蛋白(C和V),PPRV各毒株转录起始序列和转录终止序列都高度保守。同源性分析结果表明,PPRV-FY株与PPRV-Coted′Ⅰvoire89同源性最低,为89.0%,与PPRV/Tibet/30/2007株和PPRV/Tibet/2007株的同源性最高,为97.3%,其基因间隔区N-P长度一致,相似度最高,而M-F相似度最低。通过比较PPRV-FY株与参考毒株基因组末端调控序列,可以看出整个麻疹病毒属GP区和AGP区保守性较高,且存在不同程度的互补。氨基酸序列分析结果表明,PPRV-FY株在保守区域出现21处氨基酸突变,这些突变对其所编码蛋白的结构和功能有何影响尚需要进一步研究。此外,本文还基于N基因序列,对PPRV-FY株及参考毒株进行了系统进化分析。结果表明,PPRV-FY株与其它亚洲源PPRV野毒株共同形成一个拓扑群,属于第IV谱系。
- 刘柱缪秋红李琦宫晓华李传峰陈宗艳窦永喜张志东杨宗照刘光清张淼涛
- 关键词：小反刍兽疫病毒全基因组
- 新型鸭细小病毒VP3基因的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：8
- 2016年
- 应用PCR方法扩增了新型鸭细小病毒(novel duck parvovirus,NDPV)的VP3基因,然后将其克隆到原核表达载体p GEX-4T-1中,获得重组质粒p GEX-VP3。将p GEX-VP3转化BL21感受态细胞后,用1.0mmol/L IPTG于37℃进行诱导。最后,分别用SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行分析和鉴定。结果,NDPV VP3蛋白在大肠杆菌细胞中成功获得表达,表达产物主要以包涵体形式存在,分子质量为84 ku。将纯化的重组VP3蛋白免疫实验家兔,制备多克隆抗体。Western-blot检测结果表明,该抗体能同时与重组的NDPV VP3蛋白及自然感染的NDPV发生反应,说明制备的抗体具有良好的抗原反应性。这些结果为进一步建立NDPV检测方法和研发新型疫苗研究奠定了物质基础。
- 李琦李传峰唐井玉刘柱宫晓华陈宗艳王桂军吴润刘光清
- 关键词：VP3基因原核表达多克隆抗体
- 应用发酵牛粪垫料提高奶牛生产性能的研究被引量：12
- 2015年
- [目的]评估发酵牛粪对奶牛的安全性,并检验其在生产中的应用效果。[方法]比较发酵前后牛粪水分的变化,检测其细菌种类和数量,评价发酵牛粪的安全性。[结果]发酵牛粪没有能诱使奶牛发病的致病菌。临床应用时,试验组牛舍NH3含量稍高于对照组;试验组乳房炎和肢蹄病的发病率均低于对照组。2组隐性乳房炎增幅近似;试验组牛体清洁度评分优于对照组;试验组躺卧率高于对照组;发酵牛粪对奶牛的奶产量基本没有影响。[结论]发酵牛粪作为牛床垫料是可行且安全的。
- 汪保根殷冬冬宫晓华王瑞费玮彦张克春王桂军
- 关键词：细菌数体细胞数
- 鸭源新型鹅细小病毒DS15株生物学特性研究被引量：13
- 2017年
- 试验对鸭源新型鹅细小病毒(Duck derived goose parvovirus,DDPV)DS15株在鸭胚上的增殖特性及对鸭胚的致病力进行了研究。结果显示,鸭胚接种DDPV DS15株以后,96~120 h出现死亡,胚体全身出血,病毒滴度ELD50为10-5.5/0.2 m L。以鸭胚增殖的病毒攻击樱桃谷肉鸭,复制出典型的鸭"大舌病"临床症状,并从发病鸭脏器中分离到病毒。对DDPVDS15株VP2基因进行克隆并并将其因序列与国内外报道的部分鹅细小病毒(GPV)及番鸭细小病毒(MDPV)分离株的VP2基因进行比对和分析。结果表明,DS15株VP2基因与GPV之间的核苷酸和氨基酸同源性分别为89.2%~96.5%和93.4%~97.8%,而与MDPV核苷酸和氨基酸同源性则较低,分别为80.1%~89.3%和87.8%~93.5%;在亲缘关系方面,DDPV DS15株与GPV较近,提示二者可能是由同一病毒进化而来。
- 宫晓华李琦李传峰张莉唐井玉刘光清王桂军
- 关键词：鸭源鹅细小病毒鸭胚VP2基因
- 犬瘟热病毒AH株全基因组序列测定及其分子特征被引量：3
- 2017年
- 本研究对犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)安徽分离株(CDV-AH株)的全基因组序列进行了测定和分析。根据GenBank上已发表的部分CDV基因组全长序列设计了8对特异性引物,RT-PCR方法分段扩增出CDV-AH株的全基因组序列。采用DNAStar软件和MEGA软件对CDV-AH株与其他CDV毒株的基因序列进行了比对和分析,并绘制系统进化树。结果显示,CDV-AH株全长15 690 bp,编码6种结构蛋白(N、P、M、F、H和L),与CDV-PS株核苷酸序列同源性最高,为98.8%,而与CDV-1以及Onderstepoort等疫苗株的序列同源性较低,为92.1%。CDV-AH株在保守区域出现15处氨基酸突变,这些突变对其所编码蛋白结构和功能的影响需要进一步研究。基于H基因序列的系统进化分析表明,CDV-AH株与其他CDV野毒株共同形成一个拓扑群,属于亚洲Ⅰ型。
- 刘柱李丹丹李琦宫晓华缪秋红李传峰陈宗艳张淼涛刘光清
- 关键词：犬瘟热病毒
- 口疮病毒AH-GY13株的分离鉴定及B2L基因的原核表达被引量：9
- 2016年
- 为确定安徽地区某山羊场发生的疑似口疮（orf）的病原,经过临床诊断、PCR检测以及HeLa细胞培养等途径,确定其为口疮病毒（ORFV）,并命名为AH-GY13株。根据GenBank中公布的口疮病毒B2L囊膜蛋白基因序列,设计引物,用PCR方法扩增口疮病毒B2L基因,并将此基因序列及其推导的氨基酸序列与其他不同来源的ORFV分离株进行比较。结果显示,AH-GY13株与选取的10株毒株的核苷酸序列同源性在97.4%~99.3%之间,氨基酸同源性在97.9%~99.7%之间;进化树分析显示,此毒株与辽宁省分离株属于同一分支。将该基因定向插入到原核表达载体pET-32a（＋）中,构建原核表达载体pET-32a（＋）-B2L。转化BL21,经IPTG诱导,B2L基因获得表达,以包涵体的形式存在,通过优化诱导时间和IPTG的浓度,确定了表达B2L基因的最佳诱导条件：IPTG终浓度为1 mmol/L,37℃诱导4 h。Western-blot分析表明,表达产物具有良好的免疫活性。上述结果为进一步研究ORFV B2L囊膜蛋白的结构与功能奠定了基础。
- 宫晓华殷冬冬王瑞唐井玉周晓雅梅楠张雪梅兰梦蝶陈鹏王勇王桂军
- 关键词：B2L基因原核表达
- 新型鸭细小病毒病毒样颗粒的表达与鉴定
- 引言鸭短喙-侏儒综合症是由新型鸭细小病毒(Novel duck parvovirus,NDPV)引起的一种以鸭生长发育障碍,鸭喙萎缩,舌头肿胀外垂,胫骨短小质脆,行走困难为主要特征的鸭传染病。该病于2014年在我国大陆首...
- 李琦李传锋唐井玉刘柱宫晓华吴巧梅谭永贵刘光清
- 新型鸭细小病毒NS1基因的原核表达及生物信息学分析被引量：6
- 2017年
- 为研究新型鸭细小病毒(Novel duck parvovirus,NDPV)NS1蛋白的生物学功能,根据NDPV DS15株NS1基因(Gen Bank登录号:KU947420)设计1对特异性引物,对NS1全基因进行PCR扩增,将PCR扩增产物克隆入pGEX-4T-1载体,构建重组质粒pGEX-4T-NS1,并进行测序鉴定。经鉴定正确后重组质粒转化到BL21感受态细胞,SDS-PAGE和Western blot进行表达鉴定。将测序获得NS1基因编码蛋白进行生物信息学分析。结果显示,本研究构建的重组质粒可在原核细胞中成功表达97kDa的NS1融合蛋白。进一步生物信息学分析结果显示,NS1蛋白为酸性、可溶性蛋白,由627个氨基酸组成,分子质量约为72kDa。该蛋白主要位于胞浆,不含信号肽序列,无跨膜区,含有丝/苏氨酸激酶底物模序和1个潜在磷酸化位点(s546),抗原表位主要集中在多肽的C端。NS1基因的同源性及系统发生树分析表明,NDPV与鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)处于同一进化分支,遗传进化关系最近。本研究结果为揭示NDPV NS1在病毒的复制、增殖以及致病机制中的作用奠定了基础。
- 张经伟李琦陈宗艳宫晓华李国新温建新朱杰李传峰刘光清
- 关键词：克隆原核表达生物信息学
