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风湿宁胶囊含药血清干预对CIA-FLS细胞增殖及凋亡的影响被引量：2: 2016年; 目的:探讨风湿宁胶囊(FSN)含药血清干预对CIA-FLS细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用CCK-8法检测各组血清干预24、48、72 h后对CIA-FLS细胞增殖状态的影响;采用Annexin V-FITC/PI双染法通过流式细胞仪观察各组血清干预48 h后对CIA-FLS细胞早期和晚期凋亡情况的影响。结果:CCK-8法结果表明,在24 h,FSN各浓度(20%、10%和5%)含药血清干预对CIA-FLS细胞的增殖无抑制作用;在48 h,20%FSN含药血清和10%FSN含药血清干预对CIA-FLS细胞的增殖都表现出不同程度的抑制。在72 h,FSN各浓度(20%、10%和5%)含药血清对CIA-FLS细胞增殖均可见显著的抑制效果,其中20%风湿宁胶囊含药血清效果最好。Annexin V-FITC/PI双染检测结果表明,风湿宁胶囊含药血清各浓度(20%、10%和5%)组都不同程度地提高了细胞总凋亡率,其中20%风湿宁胶囊含药血清组对CIA-FLS细胞凋亡促进作用最强。结论:风湿宁胶囊含药血清对CIA-FLS细胞增殖的抑制及凋亡的促进可能是其治疗类风湿关节炎的机制之一。; 王一婕王永辉张晓圆周然; 关键词：风湿宁胶囊增殖凋亡

人ApoC-Ⅰ基因的克隆、原核表达与纯化: 2015年; 【目的】进行含信号肽ApoC-Ⅰ(signal-ApoC-Ⅰ)和ApoC-Ⅰ成熟肽(mature-ApoC-Ⅰ)的基因克隆、原核表达和纯化。【方法】取肝癌切除手术患者的癌旁组织,提取总RNA后,逆转录成c DNA,并设计带酶切位点的特异引物分别扩增出signal-Apo C-Ⅰ、mature-Apo C-Ⅰ基因;将扩增出的基因通过T克隆入PMDTM19-T载体;T克隆经测序验证后,双酶切出目的基因,连入同样双酶切后的PET28a载体,构建原核表达质粒;再次测序验证后,将质粒转入BL21Star(DE3)中,表达条件优化后进行融合表达;将表达后产物用Ni-NTA树脂亲和层析进行重组蛋白纯化;纯化产物采用Western blot进行验证。【结果】构建了PET28a-signal-ApoC-Ⅰ、PET28a-mature-Apo C-Ⅰ表达质粒,重组质粒都经过测序鉴定正确;PET28a-signalApoC-Ⅰ诱导表达后能抑制宿主菌生长,但经过条件优化2个表达质粒都在BL21Star(DE3)菌中经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导大量表达和纯化,Western blot证实了表达的结果。【结论】含信号肽ApoC-Ⅰ、ApoC-Ⅰ成熟肽的基因克隆、原核表达和纯化成功,为进一步研究重组人Apo C-Ⅰ的作用奠定了基础。; 谢伟群邝枣园孙砚辉张晓圆陈健刘思颖张韧; 关键词：基因克隆基因表达蛋白纯化

人参皂苷Rh2对LoVo细胞迁移和转移能力的影响及机制研究被引量：2: 2016年; 【目的】探讨人参皂苷Rh2对人结肠癌Lo Vo细胞迁移和转移能力的影响。【方法】通过四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法测定不同浓度Rh2对Lo Vo细胞增殖的影响,并确定用于研究抑制Lo Vo细胞迁移和转移功能作用的Rh2浓度和作用时间。设置空白对照组及Rh2实验组（5、10、20、40、60μmol/L）,通过划痕试验,对Lo Vo细胞划痕加药处理24 h后,观察不同浓度Rh2对细胞迁移的影响。采用Transwell法观察不同浓度Rh2对细胞转移的影响。采用Western blot检测不同浓度Rh2对CD44、基质金属蛋白酶2（MMP2）、基质金属蛋白酶抑制剂2（TIMP2）、E-Cadherin和β-catenin表达水平的影响。【结果】MTT结果显示：0～40μmol/L Rh2处理Lo Vo细胞24 h对其生长无明显影响。随Rh2作用时间的延长和浓度的增加,Rh2对Lo Vo细胞抑制作用逐步增强。划痕试验和Transwell结果表明：随着Rh2浓度增加,其对Lo Vo细胞迁移和转移能力的抑制作用增强,20μmol/L以上浓度的Rh2处理Lo Vo细胞24 h与空白对照组比较具显著抑制作用。Western blot结果表明：随着Rh2浓度的升高,CD44、MMP2蛋白表达水平下降,TIMP2、E-Cadherin和β-catenin蛋白表达水平上升。【结论】人参皂苷Rh2对人结肠癌Lo Vo细胞迁移和转移能力有抑制作用,其抑制作用具有时间和浓度依赖性。; 张晓圆李荣江孙继贤孙砚辉张苗苗伍志学张韧邝枣园; 关键词：人参皂苷RH2 LOVO细胞细胞迁移细胞转移细胞培养

UQCRB基因的原核表达和纯化: 2016年; 目的为研究UQCRB(ubiquinol-cytochrome c reductase binding protein)与中药的作用机制,本实验室进行了UQCRB基因的克隆、原核表达和纯化。方法提取人肝癌SMMC-7721细胞总RNA,反转录后采用特异引物进行PCR扩增获取UQCRB基因全长,产物纯化后连入T载体测定正确,克隆经NheI、XhoI双酶切后连入PET28a(+)载体,构建PET28a(+)-UQCRB原核表达质粒。在BL21(DE3)宿主菌中表达超声处理后,应用Amicon○R Pro Affinity Concentration Kit-Ni-NTA纯化,表达及纯化产物用westernblot验证。结果构建了PET28a(+)-UQCRB表达质粒,经过酶切鉴定和测序鉴定正确。重组UQCRB在BL21(DE3)中的最优表达条件为IPTG 1mM诱导5h。Westernblot证实了表达和纯化结果。结论重组UQCRB的原核表达和纯化成功,为进一步研究UQCRB的作用奠定了基础。; 孙砚辉张广献邝枣园张晓圆张韧; 关键词：克隆纯化

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张晓圆

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