文德重
- 作品数：5 被引量：0H指数：0
- 供职机构：上海交通大学医学院附属仁济医院更多>>
- 发文基金：吴阶平医学基金上海市科学技术委员会资助项目上海市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Methocult M3534培养基培养小鼠c-kit^+心脏干细胞向心肌细胞和窦房结细胞分化的结果观察
- 2019年
- 目的观察Methocult M3534(简写为M3534)培养基培养小鼠c-kit^+心脏干细胞(CSCs)向心肌细胞与窦房结细胞分化的结果。方法首先测定成年小鼠c-kit^+CSCs的自我增殖能力和多向分化潜能,然后置于CSCs常规培养基(对照组)或含1%M3534的培养基(M3534组)中培养。培养2周或3周后分别通过RT-PCR、细胞免疫荧光染色检测心肌细胞特异标记物(Gata4、cTnI、Serca2a和α-SA)和窦房结细胞特异标记物(Hcn2、Hcn4、Gata6、Tbx3、Tbx5和Cx45)的基因和蛋白;应用Western blotting法检测两组中Serca2α、Hcn4、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-Erk)和总细胞外调节蛋白激酶(t-Erk)蛋白(检测Erk信号通路在细胞分化中的作用),并比较。结果分离纯化的c-kit^+ CSCs具有自我增殖和多向分化能力。培养3周时,与对照组比较,M3534组c-kit^+CSCs心肌细胞特异标记物Gata4、cTnI、Serca2a和α-SA基因表达升高,Serca2α、α-SA阳性细胞率升高(P均<0.05);M3534组上述心肌细胞特异标记物培养3周高于培养2周时(P均<0.05)。培养3周时,与对照组比较,M3534组c-kit^+ CSCs窦房结细胞特异标记物Hcn2、Hcn4、Gata6、Tbx3、Tbx5和Cx45基因表达升高,Hcn4阳性细胞率升高(P均<0.05);M3534组上述窦房结细胞特异标记物培养3周高于培养2周时((P均<0.05)。培养3周时,与对照组比较,M3534组Serca2α、HCN4蛋白表达及p-Erk1/2/t-Erk1/2升高(P均<0.05);M3534组培养2周时Serca2α、HCN4蛋白表达及p-Erk1/2/t-Erk1/2高于培养3周时(P均<0.05)。结论与CSCs常规培养基比较,M3534培养基培养的c-kit^+CSCs向心肌细胞和窦房结细胞分化的效能更高,分化过程中可能有Erk通路参与。
- 姜爱侠冀天基文德重石林李奋
- 关键词：心脏干细胞窦房结细胞细胞外调节蛋白激酶
- 上调miRNA-21对骨髓间充质干细胞的影响
- 2020年
- 目的探讨miRNA-21对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)特性的影响。方法 BMSCs使用DMEM液进行培养传代,流式细胞仪检测BMSCs的表面相关抗原表达。建立miRNA-21慢病毒干扰载体(LV-miRNA-21),并转染BMSCs。分3组细胞进行对比实验[CK(正常组)、NC(对照组)、miRNA-21组],分别培养3 d、7 d和14 d;利用免疫荧光染色技术和Western-blotting技术检测并比较肌钙蛋白在3组细胞中3个时间点的表达情况,噻唑蓝(MTT)法检测3组BMSCs的增殖情况,运用流式细胞技术检测3组BMSCs的细胞周期及凋亡情况。结果 BMSCs呈长梭形不规则形态,表现出干细胞特异性抗原CD90和CD29阳性,CD45阴性。成功构建LV-miRNA-21;发现在miRNA-21组BMSCs中经诱导分化后肌钙蛋白表达量明显高于CK组和NC组(P<0.05),在miRNA-21组中表现出细胞的增殖加快,但凋亡速度比CK组和NC组减慢。结论 miRNA-21影响BMSCs的增殖和凋亡,可能对干细胞分化发挥着重要作用。
- 杨文钢薛松文德重郑辉单江桂
- 关键词：骨髓间充质干细胞MIRNA-21增殖凋亡分化
- 成年小鼠心脏c-kit^+干细胞的分离及诱导分化
- 2017年
- 目的从成年小鼠心脏中分离、纯化c-kit+干细胞,并观察其诱导分化结果。方法取C57BL/6雄性小鼠3只,取心脏组织,将心脏解离成单个细胞。采用CD45磁珠、c-kit磁珠分选得到c-kit+干细胞。鉴定细胞纯度,观察细胞表型。观察所得心脏c-kit+干细胞球的形成情况,对其进行诱导分化,采用RT-PCR法观察诱导分化细胞血管平滑肌细胞的标志物α-SMA和sm-22α、血管内皮细胞标志物v WF、心肌细胞标志物c Tn T、心脏干细胞标志物c-kit,观察诱导分化的细胞表型。结果心脏c-kit+干细胞c-kit+纯度为89.3%,心脏干细胞表面表达c-kit抗体。原代c-kit+干细胞生长缓慢,传代后细胞生长较快,悬浮培养可形成心脏c-kit+干细胞球。与诱导第0天比较,诱导分化第14 d时心脏干细胞α-SMA、sm-22α、v WF、c Tn T mRNA相对表达量升高,c-kit mRNA相对表达量降低,P均<0.05。心脏c-kit+干细胞在心肌细胞诱导分化培养基中培养14 d左右可见c Tn T阳性细胞。心脏干细胞在无LIF的培养基中培养14天可见v WF、α-SMA阳性细胞。结论成功从成年小鼠心脏分离心脏c-kit+干细胞,所得c-kit+干细胞c-kit+纯度高,可成功诱导分化为心肌细胞、血管平滑肌细胞及血管内皮细胞。
- 文德重周敏薛松姜爱侠黄日太
- 关键词：心脏干细胞干细胞移植缺血性心脏病
- 不同浓度依达拉奉对低氧环境下c-kit^+心脏干细胞的影响
- 2017年
- 目的观察不同浓度的依达拉奉对于低氧环境下c-kit^+心脏干细胞(CSCs)的影响。方法体外灌注酶解成年小鼠心脏,磁珠分选c-kit^+CSCs,流式细胞仪和免疫荧光染色分别检测分选后干细胞纯度和表型。将ckit^+CSCs培养基中加入不同浓度依达拉奉(0、100、300、500、700、1 000μmol/L),在1%氧条件下分别通过免疫荧光显微镜下DFCH-DA检测细胞活性氧(ROS)生产量、流式细胞仪检测凋亡率、Transwell检测细胞迁移能力、RTPCR检测成纤维细胞生长因子(bFGF)mRNA表达。结果依达拉奉浓度为1 000μmol/L时所产生的ROS量最少,与其他浓度比较有统计学差异(P均<0.05)。依达拉奉浓度为1 000μmol/L时细胞凋亡率最低,与0、100μmol/L浓度比较有统计学差异(P均<0.05)。依达拉奉浓度为700μmol/L时c-kit^+CSCs迁移数最大,与0μmol/L比较有统计学差异(P<0.05)。依达拉奉浓度为700μmol/L时,c-kit^+CSCs bFGF mRNA表达最高(P均<0.05)。结论依达拉奉通过影响细胞的凋亡率、迁移率、ROS生成和bFGF mRNA的表达对c-kit^+CSCs发挥保护作用,且在一定浓度范围内存在剂量依赖性。
- 文德重周敏薛松黄日太
- 关键词：心脏干细胞依达拉奉细胞迁移成纤维细胞生长因子
- 经皮椎体成形术后右心和下腔静脉骨水泥占位一例
- 2019年
- 临床资料患者,女,78岁,于2018年3月因跌倒引起腰椎第1、2椎体压缩性骨折,并行经皮椎体成形术。术后2个月主诉反复出现胸闷、心悸,无发热等特殊不适;既往无心脏病史、无高血压及糖尿病等心血管病高危因素存在,查体未触及心脏杂音,双下肢无水肿等特殊体征;随后于2018年7月31日门诊行冠状动脉CT血管造影(CTA)未发现冠状动脉狭窄异常,但发现右心房、右心室、下腔静脉内异物存在,复查胸腹部CT及术中数字减影血管造影(DSA)再次证实异物存在,异物位置在术前CT及术中DSA显示无改变(图1)。
- 杨文钢薛松郑辉单江桂文德重张睿
- 关键词：经皮穿刺椎体成形术骨水泥右心房右心室
