盛蕾
- 作品数：4 被引量：48H指数：3
- 供职机构：宁波出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：宁波出入境检验检疫局科研基金项目宁波市科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程更多>>
- 痕量及微量转基因大米成分半巢式PCR检测方法的建立被引量：17
- 2008年
- 采用半巢式PCR技术建立了食品中痕量及微量转基因大米成分的检测方法。根据大米内源SPS基因以及转基因大米Bt63含有的外源Cry1A(b)/Cry1A(c)融合基因和Btc基因,分别设计了6对普通与半巢式PCR引物。扩增结果显示,针对理论DNA浓度的检测灵敏度,普通PCR扩增灵敏度为1ng/μl左右,半巢式PCR扩增灵敏度达到10-3～10-4ng/μl,半巢式PCR比普通PCR方法提高了103～104倍;在质量百分比的检测灵敏度方面,普通PCR方法扩增灵敏度在0.1%～1%之间,半巢式PCR方法的检测灵敏度能够达到0.001%～0.01%,半巢式PCR比普通PCR方法要提高10倍以上。在实际样品的检测中,速冻汤圆、婴儿米粉及芝士小圆饼等食品经普通PCR扩增,其内源SPS基因条带模糊或未扩增到,进一步采用半巢式PCR扩增后,能够得到清晰明亮的特异性条带。所有样品均未扩增到外源Cry1A(b)/Cry1A(c)和Btc基因。
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- 关键词：半巢式PCR
- 烟草环斑病毒和番茄环斑病毒的半巢式RT-PCR检测被引量：23
- 2007年
- 烟草环斑病毒（Tobacco ringspot virus，TRSV）和番茄环斑病毒（Tomato ringspot virus，ToRSV）是我国禁止入境的检疫性有害生物。采用半巢式RT．PCR方法对这两种病毒进行了检测，用Trizol快速提取病毒总RNA，并根据TRSV和ToRSV的外壳蛋白基因设计特异性引物，经过第一轮RT-PCR和第二轮半巢式PCR扩增，TRSV样本分别得到359bp和206bp特异性片段，TORsV样本分别得到340bp和219bp特异性片段。半巢式RT．PCR扩增产物的测序表明，TRSV产物序列与GenBank中登录的外壳蛋白基因存在88％～97％的同源性，TORSV产物序列与GenBank中登录的外壳蛋白基因存在96％～100％的同源性。研究显示，DAS-ELISA与RT-PCR的检测灵敏度相近，而半巢式RT-PCR的检测灵敏度比这两种方法高出10^3倍以上。
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- 关键词：烟草环斑病毒番茄环斑病毒
- 痕量转基因油菜籽成分的半巢式PCR检测被引量：2
- 2007年
- 建立了痕量转基因油菜籽成分的半巢式PCR(Semi-nested PCR)检测方法,灵敏度比常规PCR提高了100倍。该方法通过改良CTAB法提取并纯化得到不同梯度浓度的DNA模板溶液。设计了4个外源基因的特异性半巢式PCR引物,以油菜籽磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因(PEP)为内标准基因,对油菜籽混合样品中外源FMV35S启动子、GOX、BARSTAR和BARNASE基因进行了检测,灵敏度达到0.001%。
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- 关键词：半巢式PCR
- 进境大豆种子中烟草环斑病毒的快速检测被引量：7
- 2007年
- 烟草环斑病毒(Tobacco ringspot virus,TRSV)是进境大豆种子必须检疫的项目,属于我国禁止入境的二类检疫性有害生物,本文建立了大豆种子中TRSV的快速检测方法。采用Trizol试剂直接提取大豆种子总RNA,通过RT-PCR扩增得到359 bp特异性产物。该产物经半巢式PCR进一步验证得到206 bp特异性片段,经测序及同源性比较表明,片段序列与GenBank中登录的TRSV外壳蛋白基因部分序列存在92%～96%的同源性,而未见与其它基因序列存在同源性。同时,大豆种子样品经DAS-ELISA复核检测结果显示TRSV阳性反应。因此,判定该批进境大豆种子携带TRSV。
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- 关键词：大豆烟草环斑病毒半巢式PCR
