胡巧云
- 作品数：9 被引量：27H指数：4
- 供职机构：广西动物疫病预防控制中心更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区科技攻关计划广西壮族自治区自然科学基金桂林市科技攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 2型猪链球菌SspA基因序列及其免疫原性分析被引量：4
- 2015年
- 【目的】明确2型猪链球菌的枯草杆菌素样丝氨酸蛋白酶(Ssp A)基因序列特征及其原核表达重组蛋白的免疫原性,为2型猪链球菌病的诊断及疫苗研究奠定基础。【方法】针对Ssp A基因上、下游序列分别设计1对引物,从112株2型猪链球菌临床分离株中扩增其相应片段,并进行测序分析;同时以Ssp A基因的重组质粒p ET28a-Ssp N、p ET28a-Ssp M和p ET28a-Ssp C分别转化感受态大肠杆菌BL21(DE3)后经IPTG诱导表达,再以SDS-PAGE检测融合蛋白表达情况,Western blotting鉴定其免疫原性。【结果】Ssp A基因上游片段较保守,而下游片段变异区间较大。在IPTG诱导下,含有重组质粒p ET28a-Ssp N、p ET28a-Ssp M和p ET28a-Ssp C的菌株表达出3段融合蛋白,其中,Ssp N和Ssp C重组蛋白存在于破碎菌体的上清液中,而Ssp M重组蛋白以包涵体形式存在于沉淀中,其大小为:Ssp N重组蛋白66 k D,Ssp M重组蛋白65 k D,Ssp C重组蛋白32 k D。Western blotting鉴定结果显示,3段重组蛋白均能与2型猪链球菌感染血清发生反应,且以Ssp N重组蛋白反应最强烈,而与以全菌灭活苗制备的猪血清未发生特异性反应。【结论】2型猪链球菌Ssp A基因上游片段较保守,经大肠杆菌重组表达的Ssp N蛋白免疫原性较强,且具备鉴别2型猪链球菌感染与免疫的潜力,可作为研究猪链球菌病血清学诊断的候选抗原片段。
- 胡巧云袁小宁熊毅何奇松黄胜斌孙翔翔吴军颜健华冯淑萍李军郭建刚
- 关键词：2型猪链球菌免疫原性
- O型口蹄疫病毒VP1蛋白竞争ELISA诊断方法的初步建立
- 2016年
- 利用表达的重组融合蛋白pGEX-6P-1-VP1作为抗原,用PET-32a-VP1蛋白免疫家兔获得的阳性血清作为FMDV阳性血清的竞争抗体,建立了检测FMDV抗体的竞争ELISA,并进行了条件优化,利用统计学方法计算竞争ELISA的阳性临界值。结果显示,重组蛋白抗原的最适包被质量浓度为1μg·mL^(-1),待检血清、酶标抗体和高免血清的最佳稀释度分别为1∶40、1∶2000和1∶500;与液相阻断ELISA试剂盒相比较,该方法的敏感性为91.3%,特异性为95.1%,符合率为96.7%。结果表明,该方法敏感性好、特异性强、重复性好,可用于O型FMDV血清抗体水平的检测。
- 何奇松陈磊颜健华冯淑萍黄胜斌胡巧云梁晟易春华许瑞胜韦达有兰宗宝熊毅
- 关键词：O型口蹄疫病毒竞争ELISA
- 一例猪伪狂犬病和高致病性猪蓝耳病混合感染的诊断被引量：5
- 2014年
- 根据流行病学、临床症状、病理变化及实验室检测,对2013年12月玉林某猪场发生的一起动物疫病进行诊断,确诊为猪伪狂犬病和高致病性猪蓝耳病混合感染。并分析广西猪伪狂犬病和高致病性猪蓝耳病发病情况、发病特点及提出预防治疗建议。
- 文崇利冯淑萍胡巧云黄胜斌马琳
- 关键词：流行病学临床症状病理变化
- A型口蹄疫病毒VP1蛋白竞争ELISA检测方法的初步建立被引量：3
- 2015年
- 用纯化的融合蛋白p GEX-6p-1-VP1作为包被抗原,4E12单抗为检测抗体与待检血清竞争固相抗原,建立了单抗竞争ELISA方法来检测口蹄疫A型抗体,并进行了反应条件的优化,确定阴阳临界值。结果表明,抗原最适包被浓度为0.625μg/m L,待检血清稀释度为1∶2,单抗最大稀释度为1∶400,酶标抗体工作浓度为1∶5000,封闭液、待检血清和单抗作用时间分别为60、60、45 min;阴阳性判断抑制率(PI)≥30%为阳性。与液相阻断ELISA检测试剂盒比对,符合率为84.8%。试验表明,建立的单抗竞争ELISA检测方法具有特异性强、稳定性好等优点,可用于口蹄疫A型血清抗体的检测,这为口蹄疫A型免疫抗体水平检测、疫情监控及流行病学调查提供了技术平台。
- 颜健华何奇松蒋家霞冯淑萍黄胜斌胡巧云易春华许瑞胜梁晟熊毅
- 关键词：A型口蹄疫病毒VP1蛋白竞争ELISA
- 2012—2013年广西部分规模猪场猪瘟群体免疫合格率与抗体离散度监测及免疫效果分析被引量：5
- 2014年
- 为了解近两年来广西部分规模猪场的猪瘟免疫抗体水平,采用阻断ELISA的方法对广西20个不同规模的猪场共计3 010份血清进行了猪瘟抗体检测,猪瘟抗体阳性2 577份,免疫合格率为85.61%,抗体离散度为34.87%。存栏数超过万头的大型规模猪场猪瘟群体合格率为92.36%(2 164/2 343),抗体离散度为27.80%;中小型规模猪场的猪瘟群体合格率为61.92%(413/667),抗体离散度为54.11%。表明大型规模猪场的猪瘟抗体水平明显好于中小型规模猪场。
- 马琳郭建刚覃芳芸胡巧云黄胜斌胡丽萍杨荣熊毅冯淑萍
- 关键词：规模猪场猪瘟抗体
- 广西不同年龄猪群中2型猪链球菌抗体水平调查分析被引量：1
- 2015年
- 为调查规模化猪场不同年龄猪群中2型猪链球菌（S.suis 2）抗体水平,本研究采用以荚膜多糖为抗原的间接ELISA对来自广西地区母猪群、肥猪群、生长猪群共1 908份血清样品进行了S.suis 2抗体检测和分析。结果显示：成年猪群中抗S.suis 2的抗体水平普遍较高,种猪场母猪血清抗体阳性率可高达95%以上,不同地区屠宰场的育肥猪血清抗体阳性率在39.2%-97.5%。对不同日龄仔猪群抗体水平检测分析显示：14日龄-42日龄期间,抗体水平随仔猪日龄的增长而呈逐渐下降的趋势;而42日龄-130日龄期间,抗体水平随日龄的增长而呈逐渐上升的趋势。此外,经产母猪群抗体水平略高于后备母猪群,并且随胎次的增加,抗体的离散度缩小。以上结果表明S.suis 2抗体在仔猪生长阶段的空白期即42日龄时,仔猪群抗体水平最低。因此,在这个阶段和之前做好S.suis的预防和免疫工作对猪群链球菌病的防控至关重要。
- 胡巧云袁小宁熊毅喻正军何奇松黄胜斌颜健华李军郭建刚
- 关键词：2型猪链球菌抗体监测免疫程序
- H1N1猪流感病毒广西分离株HA基因序列分析被引量：3
- 2013年
- 【目的】了解H1N1猪流感病毒广西分离株的分子特征,为广西猪流感疫情监控提供参考依据。【方法】采用RT-PCR对2011年分离获得的H1N1猪流感病毒广西分离株（A/swine/Guangxi/1/2011）的HA基因进行扩增,然后利用DNASTAR分析软件对测序基因片段进行整个阅读框架的核苷酸序列及其推导氨基酸序列同源性比对分析,并用MEGA4.0绘制遗传进化树。【结果】广西分离株HA基因长1701bp,编码566个氨基酸,核苷酸序列与经典SIV的同源性为88.0%~99.6%,与季节性H1N1人流感病毒的同源性为76.3%~77.3%,与欧洲类禽SIV分离株的同源性为72.9%~75.4%,与2009甲型H1N1流感病毒的同源性为99.2%~99.6%;从核苷酸遗传进化树可知,广西分离株与类禽H1N1流感病毒和人H1N1流感病毒分离株的亲缘关系较远,而与2009甲型H1N1流感病毒分离株的亲缘关系最近。广西分离毒株HA基因的裂解位点序列为IPSIQSR↓G,具有典型低致病性流感病毒的分子生物学特征;共有8个糖基化位点,其中6个位于HAl区,两个位于HA2区;广西分离株HA蛋白RBS位点的氨基酸同时具有人和猪流感病毒的特点。【结论】广西分离株（A/swine/Guangxi/1/2011）属于2009甲型H1N1流感病毒。
- 颜健华梁丹洁李春英徐贤坤胡巧云孙翔翔何奇松熊毅
- 关键词：猪流感病毒甲型H1N1流感病毒HA基因同源性
- 2011—2013年广西地区猪瘟抗体监测及免疫效果分析被引量：4
- 2014年
- 为了解广西地区猪瘟的免疫抗体水平，采用正向间接血凝试验对采集自2011-2013年广西14个地市不同规模猪场的20271份血清样品进行了猪瘟抗体检测。结果表明，广西各地的猪瘟抗体水平存在一定差异，抗体合格率为64.4%~97.5%，平均合格率为84.9%，大型规模场和中小规模场的猪瘟抗体合格率较稳定，且保持在较高水平，分别为96.0%和87.5%；农村散养户和屠宰场/市场的抗体合格率相对较低，分别为82.7%和70.5%。
- 马琳郭建刚覃芳芸胡巧云黄胜斌胡丽萍杨荣熊毅冯淑萍
- 关键词：猪瘟抗体监测免疫效果
- 广西部分地区猪群PEDV N基因克隆及序列分析被引量：3
- 2018年
- 【目的】了解广西区猪流行性腹泻病毒(PEDV)的感染及病毒的遗传变异特点,为更好防控猪流行性腹泻提供科学依据。【方法】应用RT-PCR方法从2012-2016年广西地区25个猪场收集的PEDV病料中扩增出86株PEDV的N基因,并进行序列比对及遗传进化分析。【结果】86株PEDV的N基因核苷酸同源性为94.2%~100.0%,与参考毒株核苷酸同源性为94.1%~100.0%。N基因遗传进化分析显示广西的PEDV可分为2个群,Cluster2由韩国株DR13、日本株83P-5、中国株CH/S以及本研究的GP35-8、LC37-22、LC107-5、LC107-19和LC107-16毒株组成,其他81株毒株属于Cluster 3,包括中国株DX、LJB-03、Hu N、JS-2004-2;Cluster 1和Cluster 4则由其它参考毒株组成。【结论】PEDV是引起广西规模化猪场新生仔猪腹泻的主要病原,广西地区的PEDV流行毒株可分为2个群且其N基因仍然保守。
- 许瑞胜何奇松李春英冯淑萍易春华韦达有胡丽萍黄胜斌胡巧云熊毅马琳
- 关键词：猪流行性腹泻病毒N基因遗传进化分析
