- 力达霉素-胰岛素样生长因子1融合蛋白的构建及其抗非小细胞肺癌活性研究被引量：1
- 2016年
- 目的制备一种由胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor 1,IGF-1)和力达霉素(lidamycin,LDM)构成的融合蛋白,并对其抗非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)活性进行检测。方法合成融合蛋白基因ldp-igf并将其插入到p ET30a载体中,再将获得的重组表达载体p ET30-ldp-igf转化至大肠杆菌中进行诱导表达,得到融合蛋白LDP-IGF。采用细胞免疫荧光实验和基于流式细胞术的亲和实验检测LDP-IGF蛋白与非小细胞肺癌细胞的结合能力;力达霉素的发色团(AE)与LDP-IGF蛋白在体外进行分子组装,获得强化融合蛋白LDP-IGF-AE。四甲基偶氮唑蓝法实验检测LDP-IGF-AE对不同非小细胞肺癌细胞的体外杀伤活性,PI染色结合流式细胞术检测LDP-IGF-AE对细胞周期的影响以及Annexin V-FITC/PI双染法检测LDP-IGF-AE对非小细胞肺癌细胞凋亡的诱导作用。结果经过诱导LDP-IGF蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式表达。采用Ni^(2+)亲和层析技术对包涵体蛋白进行分离纯化,经过变性和分步透析复性后获得了高纯度、有活性的融合蛋白LDP-IGF。亲和实验结果显示,LDP-IGF蛋白与非小细胞肺癌细胞具有高度的亲和力。与AE分子进行组装后获得的强化融合蛋白LDPIGF-AE对不同的非小细胞肺癌细胞系均有非常强烈的杀伤活性,且其杀伤活性显著高于力达霉素。细胞周期阻滞和细胞凋亡实验结果显示,极低浓度的LDP-IGF-AE处理可使非小细胞肺癌细胞阻滞于G_2/M期,并可显著地诱导细胞发生凋亡。结论融合蛋白LDP-IGF-AE对非小细胞肺癌细胞有强大的体外抗肿瘤活性,具有发展成为非小细胞肺癌靶向治疗剂的潜能。
- 郭晓芳朱小飞曹海英钟根深甄永苏
- 关键词：胰岛素样生长因子1力达霉素融合蛋白非小细胞肺癌
