高佳佳 作品数:5 被引量:9 H指数:2 供职机构: 北京协和医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
结直肠癌肝转移患者尿蛋白Cathepsin D的检测和意义 被引量:1 2016年 目的:本文旨在寻找一种更经济的方式来监测结直肠癌肝转移,我们尝试使用硝酸纤维素膜富集结直肠癌肝转移患者和结直肠癌患者尿蛋白,并在尿蛋白中检测Cathepsin D是否可以作为结直肠癌肝转移尿蛋白标志分子.方法:收集结直肠癌肝转移患者及结直肠癌患者随机中段尿,经抽滤法将尿蛋白富集在硝酸纤维素膜上.用蛋白免疫印迹方法检测硝酸纤维素膜上洗脱下来的尿蛋白中的Cathepsin D含量,并通过尿肌酐校正尿蛋白中的Cathepsin D含量.结果:硝酸纤维素膜可以富集到质量较好的尿蛋白,并可用于后续研究.与健康对照和结直肠癌患者相比,Cathepsin D在结直肠癌肝转移患者尿蛋白中表达升高.经尿肌酐校正后,结直肠癌肝转移患者样本中Cathepsin D含量显著高于健康对照和结直肠癌患者样本(P<0.01).结论:硝酸纤维素膜富集法可以快速富集到高质量的尿蛋白.经尿肌酐校正后,结直肠癌肝转移患者尿蛋白中Cathepsin D含量显著高于健康个体和结直肠癌患者,提示Cathepsin D可能是潜在的结直肠癌肝转移标志物. 蔡梦 李薇 高佳佳 王征 周志祥 韩玥 孙玉琳 赵晓航关键词:结直肠癌肝转移 CATHEPSIN 基于细胞表面vimentin的食管癌上皮间叶转化循环肿瘤细胞检测 被引量:3 2017年 目的建立基于细胞表面vimentin(cell-surface vimentin,csVim)的实体肿瘤细胞上皮间叶转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)样循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTC)检测技术,认识食管癌不同表型的CTC和EMT样CTC与肿瘤进展的关系.方法在具有EMT表型的食管癌细胞KYSE510-PURoc和食管癌患者外周血CTC上免疫荧光分析csVim的表达和膜转位改变.选择30例单纯手术治疗的食管癌患者术前外周血样本,经免疫磁珠负性富集并制备CTC滴片.在CTC细胞滴片上免疫荧光分析CTC、EMT样CTC和外周血白细胞并计数.统计分析不同表型CTC含量与食管癌进展的相关性.结果在食管癌KYSE 510-PURo~细胞中,csVim表达水平升高,主要定位于细胞膜,发生明显的膜转位.食管癌患者外周血具有CK8/18/19^+、DAPI^+和CD45^-表型的CTC检出率为63.3%(19/30),具有csVim^+、CK8/18/19^+、DAPI^+和CD45^-表型的EMT样CTC检出率为46.7%(14/30),占CTC检出率的73.7%(14/19).与无淋巴结转移个体相比,外周血EMT样CTC数目在伴有淋巴结转移的食管癌患者中升高,差异具有统计学意义(P=0.049).结论食管癌患者外周血CTC是一种具有异质性的细胞群体,其中EMT样CTC含量与肿瘤进展相关,有可能作为判断食管癌淋巴结转移的潜在标志,辅助监测病情进展和预测预后. 代淑阳 高佳佳 赵丽娜 孙玉琳 赵晓航关键词:食管鳞状细胞癌 循环肿瘤细胞 血清饥饿对结肠癌HCT116细胞外泌体分泌的影响 被引量:5 2016年 目的:本研究尝试使用添加无外泌体血清(E x o s o m e-d e p l e t e d F B S)的培养基培养细胞并提取外泌体,比较无外泌体血清和传统的无血清两种不同的培养条件对结肠癌H C T116细胞外泌体分泌的影响,旨在优化外泌体提取条件,使之有利于后续功能研究.方法:采用提取前24 h无血清和添加无外泌体血清培养基培养结肠癌细胞,普通光学显微镜下观察两种培养条件下细胞的生长和形态,用超速离心法分步提取分泌到细胞培养上清中的外泌体,透射电子显微镜下观察外泌体的形态,蛋白免疫印迹法分析外泌体标志蛋白,以及纳米颗粒追踪计数分析外泌体大小和含量.结果:与无血清培养条件相比,添加无外泌体血清培养的HCT116细胞生长状态良好,细胞无明显死亡现象.两种培养条件分泌的外泌体形态相近,均呈圆形或椭圆形,由脂质双分子层包裹的小囊泡,直径为40-100 nm.无外泌体血清培养条件分泌的外泌体大约是无血清培养的6倍,二种培养条件下提取的外泌体直径均为90 nm左右,与电镜结果一致.两种培养条件提取的外泌体中均检测到HSP70和CD63外泌体标志蛋白.结论:添加无外泌体血清培养HCT116细胞分泌的外泌体与无血清培养相比无明显差异,但添加无外泌体血清培养的细胞状态比无血清培养的细胞状态好,外泌体的分泌可能更接近生理条件下的生长环境,分泌的外泌体数量更多,因此无外泌体血清培养条件较无血清培养更适合结肠癌来源外泌体的提取和研究. 高佳佳 李薇 鞠强 周兰萍 赵晓航关键词:外泌体 结肠癌 血清饥饿 功能基因PURA、RUVBL2和CASP8调控消化肿瘤进展的作用机制研究 食管癌(Esophageal cancer,ECA)是我国致死率排名第四位的恶性肿瘤,其中约90%的组织学类型为食管鳞状细胞癌(Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)。食管癌早期... 高佳佳关键词:食管鳞癌 上皮-间叶转化 肝细胞肝癌 文献传递 建立基于循环肿瘤细胞上的RNA原位杂交技术 2016年 目的:循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)是一种重要的体液生物标志,通过检测C T C的数量及其表型可以动态了解肿瘤进展.本研究建立一种基于CTC细胞滴片上的RNA原位杂交方法,分析CTC表型间接了解肿瘤进展.方法:采用负性富集技术获得肝细胞肝癌患者外周血CTC等有核细胞的细胞滴片,并在CTC滴片上尝试建立RNA原位杂交技术.选择真核生物高度保守的肽基脯氨酰顺反异构酶B(peptidyl-prolyl cis-trans isomerase B,PPIB)基因作为阳性对照,合成针对PPIB基因高灵敏度的RNA杂交探针,并在实体肿瘤患者外周血CTC滴片中检测PPIB基因的转录活性.结果:用于外周血有核细胞负性富集的多种试剂,均不影响在CTC滴片上的RNA原位杂交,最终优化了对传统CTC滴片细胞的固定方式和固定时间,实现了在负性富集的肝细胞肝癌CTC滴片上的PPIB基因原位RNA杂交,获得了CTC细胞中PPIB基因转录信息,建立了实时动态监测实体肿瘤患者外周血CTC中特定基因转录活性的方法.结论:缩短采血到固定细胞的时间以减少RNA降解,通过高灵敏探针的RNA原位杂交可以实现对CTC中特定基因转录水平的实时监测. 周典蓉 李薇 高佳佳 鞠强 赵朋月 赵晓航关键词:循环肿瘤细胞