李治 作品数:31 被引量:29 H指数:3 供职机构: 重庆师范大学 更多>> 发文基金: 重庆市自然科学基金 国家自然科学基金 重庆市教育委员会科学技术研究项目 更多>> 相关领域: 生物学 农业科学 轻工技术与工程 文化科学 更多>>
铁硫簇组装蛋白在意大利蜜蜂耐受吡虫啉毒害中的应答分析 2021年 【目的】用生物信息学方法鉴定意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica)铁硫簇组装蛋白(AmIscA),分析它在意大利蜜蜂工蜂耐受杀虫剂吡虫啉毒性中的应答特征。【方法】多重序列比对分析AmIscA的氨基酸序列特征和结构域组成;在线预测该蛋白的结构以及互作蛋白网络,预测它的生物学功能;构建系统进化树分析该蛋白的分类和进化关系;构建半致死模型,实时荧光定量PCR分析AmIscA基因在工蜂耐受杀虫剂吡虫啉毒性0~48h中的表达特征。【结果】AmIscA基因cDNA序列全长514bp,编码130个氨基酸残基,计算出AmIscA的相对分子质量为14.1kDa,pI为9.06。AmIscA为疏水性蛋白,具有铁硫簇组装蛋白保守的半胱氨酸和天冬氨酸残基,并且不具备信号肽,定位于线粒体中。经48h的半致死剂量吡虫啉暴露后的工蜂存活率为45%±5%。AmIscA基因表达受吡虫啉胁迫而上调,且呈先升高后下降趋势。【结论】AmIscA积极响应吡虫啉导致的毒性胁迫,可能通过抗氧化作用潜在地参与了意大利蜜蜂对吡虫啉毒性的耐受。 何彪 王悦弟 秦启倩 陈兰春 段佳欣 许金山 李治关键词:吡虫啉 意大利蜜蜂 来自桑树的3株青枯劳尔氏菌分离株的亚分类研究 被引量:2 2017年 青枯劳尔氏菌(Ralstonia solanacearum)是导致桑青枯病的病原菌。从广东省罗岗、英德蚕区桑园的感病桑树取样,采用TZC固体培养基分离纯化得到的3株青枯劳尔氏菌菌株G11-41、G12-9、G12-50的形态特征均有差异:G11-41菌株菌落小,菌落中央深红色,菌体形态为接近球形的短杆状;G12-9菌落不规则,菌落中央呈淡红色,菌体形态为短杆状;G12-50菌落呈不规则圆形,菌体形态呈长杆状。将3个分离菌株的菌液淋灌根部接种感染桑树植株,其致病性也存在明显差异:接种G11-41菌株的植株发病率为11%,死亡率为0;接种G12-9与G12-50菌株的植株发病率和死亡率均为100%。根据Hayward分类标准进行生化型分类,3个分离株的6种碳源利用试验均呈现阳性反应,属于生化型Ⅲ。基于菌株的16S r DNA序列和内切葡聚糖酶基因(egl)序列构建的系统进化树将青枯劳尔氏菌分类为4个种群型,G11-41、G12-9、G12-50分离株同归属于种群型Ⅰ,其中:16S r DNA序列进化树上,G11-41与G12-50分离株的亲缘关系最近,分布在同一个进化小枝上;egl基因序列进化树上,强毒力分离株G12-9与G12-50分布在同一个进化小枝上,与弱毒力分离株G11-41有一定的进化距离。初步认为:在青枯劳尔氏菌的亚分类中,依据16S r DNA序列构建的系统进化树可能会更好地显示各分离株的地理来源;依据egl基因序列构建的系统进化树则可能会更好地显示出各分离株的致病性。 苗雪 唐翠明 李治 戴凡炜 党晓群 王振江 范晓东 周泽扬 王林玲关键词:桑青枯病 分离株 生化型 DNA序列 内切葡聚糖酶基因 从梨花浅粉蝶中分离得到一种微孢子虫的进化分析 本研究探讨从梨花迁粉蝶(Catopsilia pyranthe)中分离得到的一种微孢子虫的种属地位及进化关系,测定了其体内核糖体SSUrDNA、ITS及其微管蛋白基因alpha-tubulin序列.根据Nosema sp... 郑丽金 何强 党晓群 李治 许金山 周泽扬柞蚕微孢子虫长极丝型孢子总蛋白的鉴定及功能分析 被引量:1 2014年 柞蚕(Antheraea pernyi Guerin-Meneville)是中国北方重要的吐丝经济昆虫,柞蚕微孢子虫(Nosema antheraeae)引起的柞蚕微粒子病是柞蚕产业毁灭性的病害。本研究采用梯度Percoll-NaCl溶液分离纯化柞蚕微孢子虫,提取柞蚕微孢子虫总蛋白,胰蛋白酶消化,然后通过LC-MS/MS精确获得各肽段分子量,经数据库比对后共鉴定到610个蛋白。对鉴定到的蛋白质进行GO蛋白质功能分析,发现孢子时期参与大分子复合物及结构分子活性的蛋白的较多,而参与细胞催化和绑定功能、细胞过程及代谢过程的表达蛋白的所占的比例明显低于预测基因的的比例。研究认为这一结果主要与孢子期的微孢子虫脱离宿主细胞,生理不活跃,处于相对静止的时期,没有能量和物质来源有关;微孢子虫通过降低细胞活动和物质代谢,从而适应所处的环境。 龚娟娟 许金山 李治 党晓群 周泽扬 王林玲关键词:柞蚕微孢子虫 蛋白质 功能分析 意大利蜜蜂铁蛋白基因AmFer3HCH的克隆及其在温度胁迫下的应答 被引量:1 2018年 【目的】本研究旨在克隆鉴定意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica铁蛋白基因Am Fer3HCH,分析其在意大利蜜蜂应对温度胁迫时的组织表达变化,探讨铁蛋白Am Fer3HCH在蜜蜂应对环境温度胁迫中的作用。【方法】PCR扩增意大利蜜蜂铁蛋白基因Am Fer3HCH的cDNA序列,并对其编码氨基酸序列进行生物信息学鉴定;实时定量PCR分析该基因在不同温度(40℃和5℃)胁迫下的意大利蜜蜂工蜂成虫胸、中肠和脂肪体中的表达变化。【结果】PCR扩增获得意大利蜜蜂铁蛋白基因Am Fer3HCH,cDNA片段大小为507 bp,其核苷酸序列与GenBank意大利蜜蜂基因组数据库中的铁蛋白基因Fer3HCH(GenBank登录号:GB55416)的完全一致,确认为Am Fer3HCH基因序列。Am Fer3HCH鉴定为重链型铁蛋白,在系统进化上聚类于重链型铁蛋白分支,其氨基酸序列具有重链型铁蛋白特有的Fe2+氧化酶活性中心,含有铁蛋白家族成员所共有的水合氧化铁成核中心和铁离子通道。实时定量PCR分析显示,与对照组相比在短时高温(40℃,0~48 h)胁迫过程中,Am Fer3HCH在意大利蜜蜂工蜂成虫胸、中肠和脂肪体中的表达水平整体呈先上升、后下降再上升的趋势;在低温(5℃,0~6 h)胁迫处理过程中,中肠和脂肪体中Am Fer3HCH基因的表达量呈先上升后下降趋势,而在胸中表达量逐渐下降。【结论】意大利蜜蜂铁蛋白Am Fer3HCH为重链型铁蛋白,在意大利蜜蜂对极端温度胁迫的应答中扮演了重要的角色。 马荣琴 王林玲 衡惠 周泽扬 李治关键词:意大利蜜蜂 铁蛋白 基因克隆 温度胁迫 蜂蜜中原蜜黄酮类化合物HPLC图谱比较分析 被引量:3 2017年 利用高效液相色谱比较分析不同蜂种、不同产地、加工与否以及不同蜜源蜂蜜中原蜜黄酮类化合物的种类及含量差异。结果表明,意大利蜜蜂油菜原蜜和中华蜜蜂油菜原蜜总峰数和峰形都比较相似,意大利蜜蜂油菜原蜜的总黄酮含量比中华蜜蜂油菜原蜜总黄酮含量高。不同产地的意大利蜜蜂油菜原蜜的图谱峰形整体相似,总黄酮含量和黄酮类化合物种类大致相同。加工后的商品蜜总黄酮含量减少,黄酮类化合物的种类也减少,商品蜜的高效液相色谱图显示其黄酮类化合物的出峰时间靠前,主要密集分布在水溶性的分离相中。3个不同蜜源蜂蜜原蜜黄酮类化合物高效液相色谱图的总峰数和峰形都有较大差异,油菜原蜜、洋槐原蜜及柑橘原蜜的总峰数分别为65、58、70个,柑橘原蜜的总黄酮含量最高,达161.62μg/100 g。单花蜂蜜原蜜黄酮类化合物的高效液相色谱图峰形具有一定的特异性,可以作为指纹图谱用于蜂蜜蜜源的鉴定。 王琴 李治 党晓群 周泽扬 王林玲关键词:意大利蜜蜂 中华蜜蜂 黄酮类化合物 蜜源 家蚕微孢子虫表面蛋白NBO_33g0013的序列特征及亚细胞定位与功能分析 被引量:2 2017年 选择家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)表面蛋白质谱数据库中新发现的假定表面蛋白NBO_33g0013进行研究,了解该蛋白质的功能及是否参与微孢子虫对宿主细胞的侵染过程。预测该蛋白质分子质量为26.1 k D,等电点为4.59,其序列N端具有信号肽,无跨膜螺旋结构,含3个N-糖基化位点,无O-糖基化位点,不具有典型的功能结构域,与柑橘凤蝶微孢子虫(Papilio xuthus)的一个假定蛋白序列相似度达到93%。以家蚕微孢子虫CQ1分离株的基因组DNA为模板克隆该蛋白质的编码基因,构建重组表达载体进行该蛋白质的原核表达,并制备获得多克隆抗体,通过间接免疫荧光分析确证该蛋白质定位在家蚕微孢子虫孢子表面。经体外细胞感染实验初步分析,尚未发现该蛋白质参与了微孢子虫孢子对宿主Bm E细胞的粘附过程,推测该蛋白质可能为家蚕微孢子虫孢壁的结构组成型蛋白质,在孢壁的构架形成中发挥作用。 刘泽锋 马振刚 王林玲 游小林 王李 党晓群 李治 周泽扬关键词:家蚕微孢子虫 表面蛋白 原核表达 亚细胞定位 3-磷酸磷脂酰肌醇结合蛋白NbSWP12影响家蚕微粒子虫的增殖 微孢子虫是一种专性细胞内寄生的单细胞真核微生物,可以感染从原生生物到哺乳动物的几乎所有的动物,特别是无脊椎动物如昆虫和水产动物。家蚕微粒子虫是蚕业生产中检疫的重要病原,其侵染、增殖机制的研究对于了解病原、开展防治研究具有... 陈洁 黄宇康 李治 龙梦娴 潘国庆 周泽扬关键词:磷脂酰肌醇 抗性研究 家蚕铁蛋白Ferritin家族基因的鉴定及序列特征与表达谱分析 被引量:1 2017年 机体内的铁蛋白Ferritin能存储和释放铁离子,在调节细胞的铁离子平衡中发挥重要作用。采用生物信息学方法分析家蚕基因组中Ferritin基因家族成员Bm Fer1、Bm Fer2、Bm Fer3和Bm Fer4的序列特征,并通过转录组芯片数据和实时定量PCR分析其时空表达谱,为研究蚕体内的铁元素代谢机制提供基础数据。Bm Fer1、Bm Fer2、Bm Fer3具有Ferritin蛋白家族典型的5个α螺旋结构,但铁离子结合位点的种类和数量相对较少。Bm Fer1和Bm Fer3为线粒体铁蛋白,具有O糖基化位点;Bm Fer2和Bm Fer4为细胞质铁蛋白,具有N糖基化位点。Bm Fer1、Bm Fer4为重链型铁蛋白,具有典型的亚铁氧化酶活性中心,在系统进化上与代表物种的重链型铁蛋白聚为一支;而Bm Fer2为轻链型铁蛋白,无亚铁氧化酶活性中心,聚类于轻链型分支。转录组芯片数据表明,家蚕5龄幼虫中肠中Bm Fer1、Bm Fer2的表达量明显高于其他各组织,而且在头部、脂肪体、血细胞、马氏管中的表达量是Bm Fer1的平均值高于Bm Fer2。在家蚕幼虫5龄4 d至蛾期的发育过程中,Bm Fer1和Bm Fer2的表达量均明显上调,尤以上蔟后期发育至蛾期的上调最为明显。实时定量PCR分析显示,Bm Fer1和Bm Fer2在家蚕5龄幼虫丝腺组织的表达量明显高于其他组织。Western blotting分析发现Bm Fer2在家蚕胚胎细胞中有表达,并在催青后的蚕卵中上调表达,推测Bm Fer2基因在家蚕早期胚胎发育中已开始转录、表达行使其功能。 游小林 王林玲 刘泽锋 王李 周泽扬 李治关键词:家蚕 铁蛋白 原核表达 基因表达谱 球囊菌黑色素样色素的亚细胞定位及感染功能初探 2020年 【目的】鉴定黑色素样色素在球囊菌(Ascosphaera apis)孢子的定位情况,分析它在球囊菌感染意大利蜜蜂(Apis mellifera)(以下简称意蜂)幼虫中的作用。【方法】以黑色素提取法提取和纯化球囊菌孢子的黑色素样色素,制备多克隆抗血清。通过间接免疫荧光定位技术分析类黑色素在孢子中的定位特征。分别以含有孢子、黑色素样色素、孢子及黑色素样色素、磷酸缓冲液的饲料喂食意蜂3龄幼虫,统计幼虫存活率,探讨黑色素样色素在孢子感染幼虫中的作用。【结果】经分离和纯化得到了球囊菌黑色素样色素,并将它注射入小鼠(Mus musculus)体内后成功制备了多克隆抗血清。间接免疫荧光亚细胞定位结果显示黑色素样色素主要分布在球囊菌孢子壁上。感染分析结果表明:与正常摄食对照组和磷酸缓冲液对照组相比,添食球囊菌孢子使意蜂幼虫存活率有统计学意义上的下降(p<0.05),单独添食黑色素样色素对意蜂幼虫存活率没有统计学意义上的影响;较单独添食孢子处理而言,同时添食球囊菌孢子和黑色素样色素使意蜂幼虫存活率有统计学意义上的下降(p<0.05)。【结论】球囊菌黑色素样色素定位于球囊菌孢子的细胞壁上,潜在的参与了球囊菌孢子对蜜蜂幼虫的感染。 衡惠 何彪 王悦弟 董玉萍 李治关键词:黑色素 亚细胞定位