郝永杰
- 作品数：4 被引量：17H指数：2
- 供职机构：大连理工大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 脐带血造血干/祖细胞与脂肪干细胞共培养时作用距离的研究
- 造血干/祖细胞(hemtopoietic stem progenitor cells，HSPCs)在治疗贫血等血液疾病、白血病等癌症病人的造血重建、基因治疗和免疫治疗等方面有极重要的临床应用价值，因此多年来一直得到科研工...
- 郝永杰
- 关键词：脂肪干细胞细胞扩增
- 文献传递
- 同时扩增与收获脐带血来源造血干细胞及间充质干细胞的研究被引量：5
- 2010年
- 目的为利用生物反应器,实现脐带血(Umbilical cord blood,UCB)来源的造血干细胞(Hematopoietic stem cells,HSCs)与间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)的同时扩增与收获。方法为在不添加血清、只添加细胞因子组合(SCF15ng·mL-1,FL5ng·mL-1,TPO6ng·mL-1,IL-315ng·mL-1,G-CSF1ng·mL-1,GM-CSF5ng·mL-1)及海藻酸钙壳聚糖胶珠包被基质细胞支持的条件下,采用玻璃包被的聚苯乙烯(Glass coated styrene copolymer,GCSC)微载体与生物反应器相结合的策略,考察了UCB-HSCs与UCB-MSCs在转瓶及旋转壁式生物反应器(Rotating wall vessel bioreactor,RWVB)内的共培养。结果RWVB中的扩增效果最佳,12天内有核细胞(Nuclear cells,NCs)扩增了3.7±0.3倍;集落形成细胞(Colony-forming units in culture,CFU-Cs)扩增了5.1±1.2倍;CD34+CD45+CD105-(HSCs)细胞扩增了5.2±0.4倍;CD34-CD45-CD105+(MSCs)细胞扩增了13.9±1.2倍。培养结束后,通过自由沉降的方法分离UCB-HSCs和粘附在GCSC微载体表面的UCB-MSCs。同时,细胞多向诱导分化及免疫表型分析结果显示,粘附在GCSC微载体表面上的细胞能够向骨、软骨及脂肪细胞分化;并能够表达间质细胞相关表面标志CD13,CD44,CD73和CD105,而不表达造血细胞的相关表面标志CD34,CD45及HLA-DR,与骨髓MSCs相一致。结论为添加细胞因子、基质细胞及微载体支持的条件下,在生物反应器内能够实现UCB-HSCs和UCB-MSCs的同时扩增与收获。
- 范秀波宋克东刘天庆殷轶群郝永杰马学虎崔占峰
- 关键词：脐带血造血干细胞生物反应器扩增
- 脐带血来源间充质干细胞体外分离培养条件的优化被引量：11
- 2008年
- 脐带血间充质干细胞(umbilical cord blood mesenchymal stem cells,UCB-MSCs)不仅可以作为滋养层细胞支持造血干细胞在体外的大规模扩增,在造血移植过程中还能够降低并发症的发生率以及加速造血重建功能的恢复.但是,目前UCB-MSCs的原代分离培养成功率一般只有30%左右,为进一步提高该成功率,利用正交实验方法对UCB-MSCs体外培养的主要影响因素:细胞的接种密度、细胞因子的组合及用量、是否添加血清和滋养层细胞,进行逐层筛选,并对培养出的间充质干细胞进行了流式细胞分析和向成骨、软骨及脂肪方向的诱导分化检测,以期获得UCB-MSCs培养的最佳方法.实验结果表明,细胞的接种密度是UCB-MSCs培养最显著的影响因素(P<0.1),接种密度越大,MSCs越容易生长,能够培养出MSCs的几率就越大,其次为细胞因子,添加细胞因子能有效地刺激MSCs的生长.在高接种密度的基础上,添加细胞因子IL-3(15μg/L)和GM-CSF(5μg/L),可大大提高UCB-MSCs体外原代培养的成功率,从30%左右提高到90%以上.流式细胞检测结果显示,所分离培养的细胞表达间充质干细胞的抗原(CD13+、CD29+、CD44+、CD105+、CD166+),不表达造血细胞的抗原(CD34-、CD45-、HLA-DR-),并能够向成骨、软骨及脂肪方向分化,这与源于骨髓的间充质干细胞相一致.所建立的培养方法能够为UCB-MSCs的临床应用提供大量优质的种子细胞.
- 范秀波刘天庆郝永杰刘洋马学虎崔占峰
- 关键词：正交设计脐带血间充质干细胞培养条件优化细胞因子
- 脐血造血干/祖细胞与脂肪干细胞共培养的作用距离研究被引量：1
- 2011年
- 设计了一种细胞间距可调的trans well共培养方法，以研究脐带血来源的造血干／祖细胞（HS／PCs）和人脂肪干细胞（human-adipose derived stem cells，h-ADSCs）体外共培养时细胞间作用距离对造血干细胞扩增能力和脂肪干细胞在共培养后干细胞特性的影响。采用不同规格的砂纸打磨孔板的上壁面，经高精度游标卡尺测量，使两种细胞之间的有效接触间距为10--450μm不等。然后以h-ADSCs为基质细胞，分别考察HS／PCs和h-ADSCs在不同的作用距离下的共培养情况。其间每24小时对细胞进行计数，观察细胞形态。培养7天后对MNCs表面抗原CD34＋、CFU-GM集落扩增倍数进行了检测；同时也对h．ADSCs表面抗原（CD13、CD29、CD34、CD44、CIM5、CD73、CD105、CD166、HLA-DR）及其多向分化潜能（成骨、成软骨、成脂肪）进行分析以鉴定其干细胞性能。结果表明，通过transwell共培养，细胞之间在作用距离为350gm时HS／PCs的扩增效果最好，其中造血MNCs扩增了15．1±0．2倍，CD34＋扩增了5．0±0．1倍：扩增的h-ADSCs表达CD29、CD44、CD166，而不表达CD34、CD45，且在适当诱导条件下可以向成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞分化。
- 宋克东刘天庆武爽郭文华郝永杰方美云石芳鑫朱丽丽马学虎崔占峰
- 关键词：脂肪干细胞造血干祖细胞TRANSWELL共培养
