王凌云
- 作品数：7 被引量：10H指数：2
- 供职机构：内蒙古农业大学生命科学学院更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 嗜热菌β-糖苷酶基因乳腺特异性表达载体鉴定被引量：1
- 2013年
- 本研究目的在于对实验室优化构建的嗜热菌β-糖苷酶基因乳腺特异性表达载体PLOX-LacS的功能进行鉴定,检测目的基因能否正常表达。实验通过脂质体介导方法将载体质粒转染小鼠的乳腺癌细胞,筛选获得的阳性细胞通过PCR和RT-PCR的方法进行嗜热菌β-糖苷酶基因的整合检测和表达检测。基因整合PCR鉴定结果表明小鼠乳腺癌细胞基因组中整合有嗜热菌糖苷酶基因,目的片段大小为1203bp;RT-PCR表达鉴定结果显示,目的片段大小与预期相同,说明诱导后的小鼠乳腺癌细胞表达了完整的嗜热菌β-糖苷酶基因。实验表明该载体能够使目的基因整合在乳腺细胞基因组中并特异性表达。为后期生产转基因奶牛提供实验材料。
- 杜威刘羿羿王申元张东白宏伟王凌云周欢敏
- PiggyBac转座子介导的嗜热菌β-糖苷酶转基因牛研究
- 牛奶作为营养丰富的全蛋白食品,对于补充机体营养物质,促进钙、磷吸收和增强人体免疫力具有重要作用。然而,在我国高达92/%的人群对牛奶中的乳糖存在消化和吸收障碍,表现为“乳糖不耐症”。如何降低牛奶中乳糖含量,进而减少“乳糖...
- 王凌云
- 关键词：PIGGYBAC转座子乳糖不耐症核移植
- 文献传递
- 牛乳腺上皮细胞体外分离和培养被引量：3
- 2011年
- 从健康奶牛乳房无菌采取乳腺组织,通过添加两种不同的培养液来分离、培养、纯化牛乳腺上皮细胞,研究乳腺上皮细胞的体外培养效果。结果表明,使用组织块接种可以得到大量细胞用于体外培养。在以DMEM/F12为基础的普通培养液中进行乳腺上皮细胞体外培养,原代细胞生长较慢,细胞形态不典型。而添加表皮生长因子、胰岛素、氢化可的松所组成的完全培养液中,奶牛乳腺上皮细胞生长良好。并通过细胞形态学观察,细胞染色体核型分析,荧光免疫细胞染色方法鉴定了培养的细胞表达上皮细胞特异的角蛋白K14,K15。结果表明,分离培养的细胞是牛乳腺上皮细胞。
- 弓超王凌云周欢敏
- 关键词：乳腺上皮细胞体外培养奶牛
- 动物转基因研究中的技术方法被引量：4
- 2010年
- 转基因动物研究的深入为生物学的发展起到了巨大的推动作用。转基因新技术的不断出现,推动了转基因动物的发展。介绍了几种哺乳动物转基因研究中常见的方法,包括原核显微注射法、逆转录病毒感染法、胚胎干细胞介导法、生殖细胞介导法、基因打靶以及新的比较有应用前景的方法,如PiggyBac、iPS,锌指核酸酶法,并且分别对每种方法的优缺点进行了总结归纳。
- 王凌云成功周欢敏
- 关键词：转基因动物基因打靶转座子锌指核酸酶诱导多能干细胞
- PiggyBac转座子在牛成纤维细胞基因组中的转座效率与整合位点分析被引量：2
- 2013年
- 为分析PiggyBac转座子在牛成纤维细胞中的转座效率和整合位点。用转座子载体转染牛成纤维细胞,传代稀释比例分别为1:30、1:60、1:100,应用TailPCR技术分析PiggyBac转座子在牛基因组中的整合位点的特征。结果显示,转染转座子载体后的细胞,经筛选后到的单克隆数分别为177、134、79,当不加转座酶时得到的单克隆数分别为5、0.2、0差异极显著。在此基础上本实验进一步摸索转座子与转座酶的最佳比例,当转座子与转座酶的比率为10:1、5:1、2:1、1:5、1:10时单克隆数分别为4、89、127、131、125、86。结果显示插入位点与载体连接处都是TTAA序列,插入的位点没有处于外显子的,都是处于内含子、基因间序列或重复序列之中。40个整合位点可以定位到牛的14条染色体上。说明PiggyBac转座子能高效转座牛成纤维细胞并且能整合到基因组中。
- 白宏伟刘羿羿张东王凌云周欢敏
- 关键词：PIGGYBAC转座子转座酶整合位点
- 转LacS基因牛胎儿成纤维细胞克隆胚的构建及分析
- 2014年
- 嗜热菌β-糖苷酶(lac S)由于具有催化糖苷键水解进而分解乳糖的作用,因而被应用于转基因牛的研究中。本研究利用构建的普通载体plox-EGF-lac S和含有转座元件的乳腺特异性表达嗜热菌β-糖苷酶载体ZGL-LACS-EN转染牛胎儿成纤维细胞,并将挑选出的阳性细胞用作供体细胞,构建转基因克隆胚,并比较两种转基因克隆胚的发育潜能,并进行胚胎移植。结果表明,普通载体转染的转基因胚胎卵裂率(83.2%)稍高于转座子介导的转基因胚胎(75.7%),而囊胚率(15.3%/14.9%)无明显差别,但两者均明显低于非转基因的胚胎(卵裂率88.2%,囊胚率36.7%)。这为进一步培育低乳糖奶牛新品种的研究奠定了基础。
- 肖娜王凌云李志艳刘宗正周欢敏
- 关键词：牛胎儿成纤维细胞
- 利用PiggyBac载体对牛胎儿成纤维细胞的转染和筛选
- 2013年
- 利用实验室已建立并鉴定的两种质粒即不含转座子元件的普通载体plox-EGF-lacS和含有转座元件的乳腺特异性表达嗜热菌糖苷酶的载体ZGL-LACS-EN对牛胎儿成纤维细胞进行转染,筛选得到含有目的基因的单克隆用于核移植实验。对两种质粒的转染筛选结果表明,常规线性化质粒筛选单克隆效率很低,但多数细胞状态稍好于转座子载体转染筛选的单克隆。
- 李志艳王凌云肖娜周欢敏
- 关键词：转染细胞筛选
