张帅
- 作品数:5 被引量:7H指数:2
- 供职机构:重庆医科大学更多>>
- 发文基金:重庆市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域:医药卫生更多>>
- 去氧紫草素的应用
- 本发明公开了去氧紫草素(5,8-二羟基-2-(4-甲基-3-苯基)-1,4-萘二酮)在体外作为组氨酸激酶VicK抑制剂或者在制备组氨酸激酶VicK抑制剂中的应用,对体内对肺炎链球菌及临床耐青霉素肺炎链球菌均有一定的抗菌作...
- 尹一兵张雪梅张帅胥文春刘宇思
- 文献传递
- 鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白可增强DnaJ蛋白的免疫反应被引量:2
- 2014年
- 目的:明确鞭毛蛋白的黏膜佐剂作用,并研究其与DnaJ蛋白联合免疫对肺炎链球菌感染的保护作用。方法:含有重组质粒pET-28(a)/鞭毛蛋白基因的大肠杆菌DE3经IPTG诱导后表达鞭毛蛋白,纯化后用于后期动物实验如下:将C57BL/6小鼠随机分为四组通过鼻腔分别滴入鞭毛蛋白(10μg)与DnaJ蛋白(10μg)混合剂(实验组)、DnaJ蛋白(10μg)(对照组1)、DnaJ蛋白(10μg)与GST蛋白(10μg)混合剂(对照组2),每组均30μl。通过检测抗体的效价、亚型以及细胞因子水平来评估鞭毛蛋白能否提高肺炎链球菌DnaJ蛋白诱导的免疫效应;然后用肺炎链球菌D39(5×107CFU)进行鼻腔攻毒,观察小鼠的生存率,以评估其保护效应。结果:实验组较对照组产生更高效价的血清IgG(其中主要产生IgG1)和更高水平的细胞因子IFN-γ、IL-17A和IL-4;另一方面实验组对致死性D39感染的保护率达60%,DnaJ蛋白免疫组的保护率为50%。结论:鞭毛蛋白与DnaJ蛋白联合应用可以增强宿主对DnaJ蛋白的免疫反应,并且对致死剂量的肺炎链球菌感染有保护作用,提示鞭毛蛋白可以作为肺炎链球菌DnaJ蛋白疫苗的佐剂应用。
- 严明刘宇思张帅胥文春王虹张雪梅
- 关键词:鞭毛蛋白肺炎链球菌佐剂
- 肺炎链球菌组氨酸激酶(VicK)中药单体抑制剂的抗菌作用研究
- 目的: 双组份系统VicR/VicK是肺炎链球菌中唯一一个与细菌生存相关的TCS系统,调控着维持细胞壁稳态的基因表达,而且调节细菌对抗生素的耐药性。其中VicK为含449个氨基酸的组氨酸激酶受体,负责接收外界信号刺激并...
- 张帅
- 关键词:肺炎链球菌抗菌作用组氨酸激酶
- 文献传递
- 肺炎链球菌SpxB蛋白的细胞表达定位、保守性分析及其生物学功能初探被引量:3
- 2014年
- 目的鉴定肺炎链球菌中spxB基因编码蛋白的丙酮酸氧化酶活性、细胞表达定位和保守性表达,并初步研究该基因对细菌毒力影响的部分机制。方法利用PCR方法扩增肺炎链球菌D39菌株的spxB基因全长序列,并将其整合至表达载体pET-28a(+),经测序鉴定后,将重组质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3),以IPTG诱导表达含有His标签的rSpxB蛋白,经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,使用SDS-PAGE鉴定蛋白纯度,采用一种商品丙酮酸氧化酶活性质控方法鉴定其酶活性。以rSpxB蛋白免疫昆明小鼠获得其多克隆抗体。采用ELISA检测多克隆抗体效价,采用Western blot鉴定抗体的特异性和蛋白的保守性表达。采用流式细胞术鉴定spxB的细胞表达定位。构建spxB缺陷菌,通过与流感嗜血杆菌进行共同培养初步探索其毒力机制。结果实现了具有丙酮酸氧化酶活性SpxB蛋白的可溶性表达,该蛋白免疫小鼠后获得高效价特异的抗SpxB蛋白抗血清,Western blot鉴定显示SpxB蛋白在1、2、4、6B、14、19F和23F等血清型肺炎链球菌均有表达,流式细胞术检测显示SpxB蛋白的荧光信号较阴性对照有右移,但较阳性对照的荧光信号弱很多。野生菌株D39产生的过氧化氢显著高于spxB缺陷菌,D39菌株对流感嗜血杆菌的生长抑制作用显著强于spxB缺陷菌。结论肺炎链球菌spxB基因编码的蛋白具有丙酮酸氧化酶活性,在肺炎链球菌中有保守表达,且主要表达于细胞内。该蛋白有助于肺炎链球菌与流感嗜血杆菌共同生长时的优势生长。
- 王哲王建敏马峰张帅黄远帅张雪梅
- 关键词:肺炎链球菌丙酮酸氧化酶保守性
- 肺炎链球菌组氨酸激酶VicK的全长表达及其保守性分析被引量:1
- 2014年
- 目的全长表达肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)VicK蛋白并制备其多克隆抗体,对其进行保守性分析和亚细胞定位,为其作为抗菌药物筛选靶点提供实验依据。方法利用分子生物学技术构建pET-28a(+)-vicK原核表达质粒,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中进行表达,经Ni-NTA亲和纯化后,通过试剂盒检测其激酶活性。将纯化的VicK蛋白免疫Balb/C小鼠,并用ELISA和Western blot方法分别检测其多克隆抗体的效价及特异性。采用流式细胞术对VicK蛋白进行表面定位分析。结果成功获得VicK全长蛋白,酶活性检测结果提示具有ATP激酶活性。VicK蛋白免疫小鼠获得效价达1:125000以上的多克隆抗体。Western Blot结果显示其能特异地识别1型、2型、3型、4型、6B及19F型S.pn中的VicK蛋白。流式结果表明VicK蛋白主要位于胞内。结论获得具有ATP激酶活性的S.pn VicK全长蛋白,且该蛋白保守表达于S.pn胞内。
- 张帅刘宇思王虹王哲王维张雪梅
- 关键词:肺炎链球菌表达纯化多克隆抗体激酶活性