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贾鹏: 作品数：10 被引量：18H指数：3; 供职机构：军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程重点实验室更多>>; 发文基金：吉林省科技发展计划基金国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学理学更多>>

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含Apoptin基因重组腺病毒的构建及鉴定被引量：2: 2008年; 目的:构建携凋亡素(Apoptin)基因重组腺病毒,为进一步研究Apoptin基因抗肿瘤作用分子机制建立基础.方法:利用BamHⅠ和SpeⅠ双酶切质粒pVAX1-Apoptin,获得Apoptin片段并连接入pacAd5 CMV K-N pA,构建含Apoptin基因的穿梭质粒pacAd5-Apoptin.利用PacⅠ单酶切对pacAd5-Apoptin和腺病毒基因组质粒(pAd5)进行线性化处理后应用脂质体介导法共转染AAV-293细胞,分别利用蚀斑纯化和RT-PCR、Western blot等方法对重组病毒进行筛选和鉴定,并测定所获得重组病毒的滴度.结果:所构建重组腺病毒中的Apoptin基因得到了正确转录,表达产物的相对分子质量约为13kDa,与CVA阳性对照一致;所获得重组腺病毒可有效表达Apoptin蛋白,该蛋白与CAV阳性血清具有反应原性,重组病毒滴度为1011PFU/L.结论:成功构建含Apoptin基因的重组腺病毒,所获得重组病毒的滴度可以满足体内外实验要求.; 陈漉金宁一李霄刘立明贾鹏刘妍高鹏陆蕴松迟宝荣; 关键词：腺病毒载体逆转免疫印迹法

抗肿瘤双特异免疫导向治疗制剂CAtin的表达及活性分析被引量：7: 2009年; 结合生物信息学方法与已知癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen,CEA)特异性单链抗体(Single chainFv fragment,scFv)核苷酸序列,经分子设计和密码子优化后,通过化学方法合成CEA二硫键稳定性单链抗体(Disulfide stabilized single chain Fv fragments,scdsFv)基因片段.将凋亡素基因(Apoptin)通过一段柔性连接肽(Linker)连接在CEA scdsFv基因下游,并克隆入大肠杆菌表达载体质粒pET28a,转化BL21感受态菌后经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导,表达融合蛋白CAtin.SDS-PAGE和Western-Blot分析表明,目的蛋白得到良好表达,经条件优化后表达量最高可达44.1 mg/L.融合蛋白经分步洗涤法和谷胱甘肽对表达的目的蛋白进行初步纯化和复性后,利用人肝癌细胞(HCC)对所制备融合蛋白进行亲和力测定、细胞结合活性测定和特异性细胞杀伤活性分析.结果显示,所制备融合蛋白不仅能够有效地与上述肿瘤细胞结合,并对其具有明显的杀伤活性,表明成功制备了具有特异性识别和特异性杀伤活性的双特异抗肿瘤免疫导向制剂.; 李霄金宁一李昌田明尧陈漉贾鹏刘立明刘妍高鹏; 关键词：癌胚抗原凋亡素基因原核表达

含新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶基因重组腺病素的构建及鉴定被引量：4: 2009年; 目的：构建表达新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶（Hemagglutinin—neuramidinase，FIN）基因的重组腺病毒，为进一步研究HN基因对消化道肿瘤的抑制作用及分子机制建立基础。方法：用BamHI和XbaⅠ双酶切质粒pVHN，将获得的HN基因片段连接入穿梭质粒pacAd5 CMV K-N pA，构建含HN基因的穿梭质粒pacAd5-HN。利用PacI单酶切对pacAd5-HN和腺病毒基因组质粒（pAd5）进行线性化处理后应用脂质体介导法共转染AAV-293细胞，分别利用蚀斑纯化和RT-PCR、Western blot等方法对重组病毒进行筛选和鉴定，并测定所获得重组病毒的滴度。结果：所构建重组病毒可有效表达HN基因，表达产物分子量约为63kD，重组病毒滴度为10^8～10610PFU／ml。结论：成功构建含HN基因的重组腺病毒，所获得重组病毒的滴度可以满足体内外实验要求。; 陈漉金宁一李霄刘立明贾鹏刘妍高鹏陆蕴松李明迟宝荣; 关键词：NDV HN基因重组腺病毒抗肿瘤

猪源戊型肝炎病毒基因IV型ORF3编码蛋白的表达及鉴定被引量：1: 2008年; 通过PCR从已构建的猪源戊型肝炎病毒全基因克隆扩增ORF3全基因,将扩增产物插入到pMD18-T载体中,亚克隆至原核表达载体pET28a(+),构建pET28a-ORF3表达载体,转入E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达。Ni-NTA层析柱纯化表达蛋白,用SDS-PAGE、免疫印迹、ELISA等方法分析鉴定表达产物。结果成功扩增到345bp的目的基因;构建了重组表达载体pET28a-ORF3;转化宿主菌E.coliBL21(DE3)后表达产物的相对分子质量在6.50～16.5kDa之间,与预期表达的目的蛋白相对分子质量相符;表达的目的蛋白能与阳性猪源和人源血清发生特异性反应,证实其具有较好的反应原性。; 屈勇刚贾鹏金宁一陆民孙中锋朱光泽于芳刘玉生夏志平; 关键词：戊型肝炎病毒结构蛋白原核表达

检测猪粪便中基因4型戊型肝炎病毒的实时荧光定量RT-PCR方法的建立被引量：3: 2010年; 针对基因4型戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)基因组ORF3设计特异性引物和探针,建立了一套TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法。评价了该方法的准确性和灵敏性,同时与常规RT-PCR和巢式RT-PCR方法进行了对比分析。结果表明,生成的标准曲线显示各浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数(r2)为0.994,斜率为-3.312,PCR效率为100%。组内和组间重复性试验相同稀释度标准质粒Ct值之间差异均不显著,并且能够准确的从HEV阳性猪粪便样品中检测到基因4型HEV RNA,具有较好准确性。可检测到戊型肝炎病毒数量为(1.7×101)copies,比普通RT-PCR的灵敏度高100倍,比Nested RT-PCR高10倍。; 贾鹏金宁一李霄朱光泽刘妍高鹏徐晓红杨恩成孟日增阚式绂; 关键词：戊型肝炎病毒 RT-PCR

重组HEV衣壳蛋白截短体的表达及鉴定被引量：2: 2012年; 戊型肝炎(HE)是由戊型肝炎病毒(HEV)感染引起的肠道病毒性传染病.HEV是一种无囊膜的单股正链RNA病毒,其编码区由3个开放阅读框(ORF)组成,属戊型肝炎病毒科.HEV衣壳蛋白由ORF2编码.本研究根据编码HEV ORF2 aa382～aa674的核苷酸序列克隆了p293基因,并将其克隆入原核表达载体pET28a,利用大肠杆菌BL21(DE3)对HEV衣壳蛋白截短体(p293)进行了表达.SDS-PAGE和Western blot检测结果表明,在优化的表达条件下(1 mmol/L IPTG,250 r/min,37℃,5 h),重组蛋白p293能够在大肠杆菌内有效表达,目的蛋白约占总蛋白的66.15%.TEM检测结果显示,原核表达的p293能够在体外形成约30～40 nm的病毒样颗粒.免疫印迹和免疫荧光检测结果表明,p293与HEV标准阳性血清具有良好的反应原性和反应特异性.实验结果表明,p293可应用于HEV宿主吸附和病毒装配研究,为HEV的预防与诊断研究奠定了基础.; 李霄屈勇刚贾鹏刘立明季慧范赫东芸金宁一迟宝荣; 关键词：戊型肝炎病毒衣壳蛋白病毒样颗粒原核表达

实验室内痘苗病毒的危险性分析: 痘苗病毒(Vaccinia Virus)在实验室研究中被广泛使用。痘苗病毒非高度减毒株对人类来说具有致病性,在美国目前形势下,操作痘苗病毒非高度减毒株的实验室人员被推荐使用生物安全二级实验室设施。尽管这样,实验室相关的痘...; 阚式绂金宁一李霄刘妍高鹏徐晓红贾鹏温中梅; 关键词：痘苗病毒预防接种感染病例 TK基因; 文献传递

表达新城疫病毒F基因的重组鸡痘病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：2: 2011年; 采用荧光染料SYBR Green渗入法,通过对real-time PCR反应条件进行优化,建立了real-timePCR检测方法,用该方法定量分析新城疫病毒(NDV)F基因在重组鸡痘病毒(rFPV-F-VP0)第1、5、10、15、20代次中的表达整合情况。结果表明,建立的标准曲线呈现良好的重复性和特异性,与模板浓度呈现良好的线性关系。在线性浓度范围内,随着模板量的减少,其对应的Ct值相应增大,0.99<相关系数(r2)<1,0.8<扩增效率(E)<1.2,熔解曲线为单一特征峰型。本试验精确定量了外源基因在重组鸡痘病毒中的表达水平,为阐明重组鸡痘病毒的表达机理提供了理论基础。; 任静强朱战波贾鹏赵权袭莹刘存霞龙川杜寿文岳云强鲁会军金宁一; 关键词：新城疫病毒 F基因 SYBR 实时荧光定量聚合酶链反应鸡痘病毒

实验室内痘苗病毒的危险性分析: 痘苗病毒(Vaccinia Virus)在实验室研究中被广泛使用.痘苗病毒非高度减毒株对人类来说具有致病性,在美国目前形势下,操作痘苗病毒非高度减毒株的实验室人员被推荐使用生物安全二级实验室设施.尽管这样,实验室相关的痘...; 阚式绂金宁一李霄刘妍高鹏徐晓红贾鹏温中梅; 关键词：痘苗病毒危险性; 文献传递

戊型肝炎的人畜共患性质及其病毒基因型分析: 戊型肝炎以往称非甲-非乙型肝炎,由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)引起的一种自限性疾病。目前,戊型肝炎病毒主要分为5个基因型(基因Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型),并且,不同的基因型存在许多亚型。不同基因...; 贾鹏金宁一李霄屈勇刚; 关键词：戊型肝炎病毒基因型; 文献传递

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