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单核细胞增生李斯特菌prfA基因重组菌的构建及其生物学特性研究被引量：1: 2012年; 为制备单核细胞增生李斯特菌(LM)减毒的prfA基因重组菌,本研究通过构建重组质粒pKSV7-ΔprfA-gfp,电转化至LM TA感受态细胞中,将绿色荧光蛋白基因gfp插入LM的prfA基因第25 bp～93 bp之间,在42℃和10μg/mL氯霉素的双重选择压力下,筛选LM重组菌(rLM-ΔprfA-gfp),并对其生物学特性进行鉴定。试验结果表明,重组菌与亲本菌相比具有相似的体外生长特性,溶血素基因(hly)mRNA的转录水平降低;对小鼠的毒力显著减弱,其LD50由105.53升高到109.79,对肝、脾、肾的损伤不明显;免疫保护力试验显示重组菌与LM TA灭活疫苗的保护率分别为90%和35%,表明rLM-ΔprfA-gfp比传统疫苗具有更高的保护力。本研究构建的rLM-ΔprfA-gfp具有良好的遗传稳定性,并且具有较好的免疫原性,为LM活疫苗载体和分子标记疫苗的研制奠定了基础。; 丁波孟庆玲乔军陈创夫才学鹏张再超杨丽红; 关键词：单核细胞增生李斯特菌同源重组

单核细胞增生李斯特菌毒力基因prfA的改造及部分生物学特性研究: 单核细胞增生李斯特菌（Listeriamonocytogenes，LM）是一种重要的的人兽共患病原菌,该菌不仅可引起动物的急性传染病，而且免疫力低下的人群也易感染发病，被世界卫生组织（WorldHealthOrganiz...; 丁波; 关键词：单核细胞增生李斯特菌生物学特性免疫应答基因重组; 文献传递

单核细胞增生性李斯特菌与胎儿弯杆菌的检测试剂及应用: 本发明公开了单核细胞增生性李斯特菌与胎儿弯杆菌的检测试剂，包含能扩增单核细胞增生性李斯特菌InlJ基因和胎儿弯杆菌16SrDNA基因的2对特异性引物；公开了其制备方法：单核细胞增生李斯特菌InlJ基因和胎儿弯杆菌16Sr...; 孟庆玲乔军陈创夫丁波张再超田振中蔡扩军杨丽红

一种单核细胞增生性李斯特菌prfA基因缺失菌的构建方法: 本发明为单核细胞增生性李斯特菌prfA基因缺失菌的构建方法，主要包括以下步骤：根据选择的<I>prfA</I>基因和<I>gfp</I>基因的靶序列分别进行引物的设计；克隆载体pMD-T-△prfA-gfp的构建；重组穿...; 孟庆玲乔军丁波张再超杨丽红田振中蔡扩军陈创夫; 文献传递

猪白细胞介素-2在BHK-21细胞中表达及其活性分析被引量：1: 2011年; 为鉴定BHK-21细胞中稳定表达猪白细胞介素-2(PoIL-2)的活性,本研究利用RT-PCR技术从猪的淋巴细胞中克隆PoIL-2基因,将其连接于pcDNA3.1载体中,并转染BHK-21细胞。经过G418筛选及RT-PCR鉴定,获得稳定表达PoIL-2基因的BHK-21细胞系。采用实时定量PCR及ELISA测定PoIL-2在BHK-21细胞内的表达,同时以淋巴细胞增殖试验(MTT)检测PoIL-2蛋白活性。试验结果表明稳定整合PoIL-2基因的BHK-21细胞系其PoIL-2mRNA的转录效率是阴性对照组1.43倍,蛋白表达量是阴性对照组1.29倍。MTT试验表明真核表达的PoIL-2促淋巴细胞增殖活性与阴性对照组相比差异极显著(p<0.01),表明BHK-21细胞表达的PoIL-2具有良好的生物学活性。本研究为开发新型基因工程疫苗佐剂和抗病毒制剂奠定了基础。; 王大伟乔军张辉胡圣伟丁波陈创夫; 关键词：猪白细胞介素2 真核表达实时定量PCR

单核细胞增生性李斯特菌与胎儿弯杆菌的检测试剂及应用: 本发明公开了单核细胞增生性李斯特菌与胎儿弯杆菌的检测试剂，包含能扩增单核细胞增生性李斯特菌InlJ基因和胎儿弯杆菌16SrDNA基因的2对特异性引物；公开了其制备方法：单核细胞增生李斯特菌InlJ基因和胎儿弯杆菌16Sr...; 孟庆玲乔军陈创夫丁波张再超田振中蔡扩军杨丽红; 文献传递

链球菌GapC基因重组痘苗病毒的构建及筛选与鉴定被引量：1: 2012年; 为了研制链球菌性奶牛乳房炎的有效疫苗,首先用PCR方法扩增出停乳链球菌的GapC基因。其次将GapC基因连接到pSC11穿梭质粒上,构建pSC11-GapC重组穿梭质粒。然后在脂质体的介导下将pSC11-GapC转染已感染痘苗病毒的BHK-21细胞,使之与痘苗病毒基因在BHK-21细胞内进行同源重组,得到GapC重组痘苗病毒,用rVV-GapC表示。最后用蓝斑法连续筛选5次rVV-GapC重组毒,再用PCR和Western blot分别检测rVV-GapC的重组和表达情况。结果显示,PCR电泳检测到目的条带,测序结果与GenBank公布的标准序列同源性99%,Western blot试验证明GapC蛋白在重组毒中进行了表达。rVV-GapC构建成功。重组痘苗病毒的构建为链球菌性奶牛乳房炎疫苗的研究奠定基础。; 李国华李贞乔军陈创夫才学鹏孟庆玲丁波; 关键词：痘苗病毒

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丁波