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针对gG基因的牛传染性鼻气管炎病毒新型检测方法建立和应用: 牛传染性鼻气管炎(Infectious Bovine Rhinotracheitis, IBR)是牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious Bovine Rrhinotracheitis viruses, IBRV)引...; 王冰; 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 PCR 单克隆抗体夹心ELISA 竞争ELISA; 文献传递网络资源链接

水牛IFN-γ在毕赤酵母中的表达及其单克隆抗体的制备: 2013年; 本研究旨在建立水牛IFN-γ(Bubalus bubalus IFN-γ,Bb IFN-γ)体外释放检测法,为定量检测水牛IFN-γ、开发水牛结核病及其他疫病的检测技术奠定基础。克隆了水牛IFN-γ成熟肽基因片段,根据测序结果,在不改变氨基酸序列的情况下,将密码子替换成毕赤酵母偏爱密码子并合成全基因,进一步用毕赤酵母GS115表达了水牛IFN-γ成熟肽基因。通过水疱性口炎病毒(VSV)在牛肾细胞(MDBK)上检测了其抗病毒活性,抗VSV活性为7.44×105 U/mL。利用酵母表达的水牛IFN-γ蛋白免疫Balb/c小鼠,并筛选阳性杂交瘤细胞,获得5株高效价的单克隆抗体。利用该重组蛋白免疫日本长耳大白兔,得到高效价的抗水牛IFN-γ多克隆抗体。用所获得的单克隆抗体及多克隆抗体建立了检测水牛IFN-γ的双抗体夹心ELISA方法,检测灵敏度达到125pg/mL。通过建立的方法分别检测了原核表达的奶牛IFN-γ、梅花鹿IFN-γ、弥猴IFN-γ以及其他7种非相关重组蛋白,结果表明所建立的方法灵敏度高,特异性好。; 邹新峰郭爱珍陈颖钰胡长敏王冰刘晓乐谢倩姜勇张策陈焕春; 关键词：水牛 Γ干扰素毕赤酵母双抗体夹心酶联免疫吸附试验单克隆抗体

萝卜-芥蓝异源四倍体F_4和F_(10)世代DNA甲基化变异的MSAP分析被引量：4: 2010年; 以人工合成的萝卜-芥蓝异源四倍体的F4和F10世代为材料,用MSAP法检测2种材料DNA甲基化变异情况,以期为远缘杂交后不同世代间基因组DNA甲基化遗传和变异规律提供实验依据。结果表明:F4代和F10代甲基化程度分别为30.61%和33.10%,共检测12种甲基化变异模式,可以分为5种类型,甲基化变异位点占所有甲基化位点的41.71%。用甲基化抑制剂5-氮胞苷处理F4代,F10代材料,检测到甲基化程度分别为20.67%和25.75%,F代比F代受到了更大冲击,说明不稳定世代对环境的影响更加敏感。; 李象松魏丽华李炫丽汪艳杰王冰吴江生龙鸿; 关键词：MSAP 异源多倍体 5-氮胞苷

梅花鹿γ-干扰素在牛型结核病中的应用研究进展: 2009年; 梅花鹿γ-干扰素是细胞因子超家族中干扰素家族的特殊重要成员之一,具有广泛的生物学功能。其功能的多样性是通过诱导细胞表达多种蛋白质实现的。对梅花鹿γ-干扰素的诱导与产生、结核病特异性基因、梅花鹿γ-干扰素用于牛型结核病的检测原理及γ-干扰素优劣的研究进展进行综述。; 刘颖王冰陈伟郭爱珍; 关键词：梅花鹿 Γ-干扰素结核杆菌

萝卜-芥蓝杂种F_1代创制及杂种鉴定被引量：7: 2010年; 以萝卜为母本,以芥蓝为父本,采用人工去雄授粉的方法进行杂交,然后通过胚抢救(embryo rescue)得到F1代植株,并利用RAPD技术对杂种F1代幼苗进行了鉴定。RAPD鉴定结果表明:杂种表现出亲本的特异带或者亲本不具备的新谱带,有的还遗失了亲本的特异带或者共有带。; 魏丽华李象松李炫丽汪艳杰王冰吴江生龙鸿; 关键词：远缘杂交胚抢救

奶牛传染性鼻气管炎病毒gG基因PCR检测方法的建立被引量：9: 2011年; 本试验旨在建立一种PCR技术,既能快速检测牛传染性鼻气管炎病毒,又能区分同属病毒牛疱疹病毒5型和伪狂犬病病毒。根据基因库中牛传染性鼻气管炎病毒gG基因的特异性引物,建立PCR方法,对牛传染性鼻气管炎病毒参考毒株和阳性样本进行扩增,结果均能扩增出一条463bp的特异性条带;对同属的牛疱疹病毒5型进行扩增,获得651bp和431bp两条带;对同属伪狂犬病病毒进行扩增,获得493bp的条带;而非相关病毒(如猪呼吸与繁殖综合征病毒等),不能扩增出条带。对牛传染性鼻气管炎病毒的检测灵敏度为2×10-3 PFU/mL。鉴于该方法具有良好的灵敏度和特异性,将在牛疱疹病毒感染诊断和标记疫苗免疫后的鉴别诊断方面具有良好的应用前景。; 王冰张敏敏邹新峰郭爱珍; 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 PCR 牛疱疹病毒

梅花鹿γ-干扰素在不同真核细胞系中稳定表达的研究被引量：2: 2010年; 提取经植物血凝素诱导培养的梅花鹿外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出梅花鹿γ-干扰素成熟蛋白基因,经克隆测序表明与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。将其重组到含有CMV增强子的真核表达载体质粒pCI-neo上。利用磷酸钙介导转染法将重组载体质粒pCI-neo-CerIFN-γ转染入中国仓鼠肾细胞(BHK-21)和牛肾细胞(MDBK)中,在G418抗性压力下进行筛选培养获得了稳定分泌表达的转染细胞系。通过Western blotting检测确定表达产物的相对分子质量分别为23、20、16ku,与预测大小一致。本研究成果为进一步开发梅花鹿生物制品类治疗制剂奠定了基础。; 刘颖王冰于清龙熊家军杨利国陈焕春郭爱珍; 关键词：梅花鹿 Γ-干扰素细胞系真核表达

牛疱疹病毒gD-PCR鉴别检测方法的建立被引量：3: 2010年; 建立一种PCR技术,既能快速检测疱疹病毒1型成员牛传染性鼻气管炎病毒(bovine infectious rhinotracheitisvirus,IBRV),又能区分牛疱疹病毒5型和伪狂犬病毒。根据基因库中牛传染性鼻气管炎病毒的gD基因序列,应用primer 5.0软件设计了gD PCR引物,建立PCR方法,反应条件是:94℃预变性5min,94℃1min,58℃1min,72℃1min,30个循环,72℃7min,4℃5min。该方法能从IBRV阳性样本和参考毒株中扩增出372bp的目的片段,而从同属的牛疱疹病毒5型中扩增出440bp和206bp两条目的片段,从同属的伪狂犬病毒中扩增出303bp的目的片段,但不能从非疱疹病毒属成员猪呼吸与繁殖综合征病毒中扩增出目的条带。该PCR检测IBRV的灵敏度可达1PFU/mL以上。鉴于其灵敏度高、特异性好,可望在牛疱疹病毒感染快速鉴别检测方面发挥重要作用。; 王冰张敏敏刘正飞陈焕春郭爱珍; 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 PCR GD

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王冰