杨丽
- 作品数：13 被引量：55H指数：4
- 供职机构：青岛大学更多>>
- 发文基金：重大基础研究前期研究专项青岛市自然科学基金项目国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 嗜麦芽寡养单胞菌D2株单加氧酶基因的克隆与表达
- 2010年
- 构建嗜麦芽寡养单胞菌D2株荧光素样单加氧酶基因表达克隆载体,并进行融合表达。PCR扩增出嗜麦芽寡养单胞菌D2菌株基因组DNA中包含单加氧酶基因约1300bp的核酸片段,将其克隆到T载体pMD-18中进行序列测定,所得序列申请并获得GenBank登记号（GQ122330）。DNA star软件分析发现该基因片段中含有一个996bp的完整开放读码框架（ORF）,与GenBank中收录的S.maltophilia R551-3（CP001111/GenomeProject17107）和K279a（AM743169）的MO基因核酸序列同源性分别为90%和89%,氨基酸序列同源性分别为93%和90%。根据该ORF序列设计分别含有BamHⅠ和HindⅢ酶切位点的表达克隆扩增引物,PCR扩增、双酶切后将产物亚克隆到pET32a载体中,经过双酶切验证,证实成功获得了表达重组载体pET32a/MO;将其转化宿主菌E.coli BL21,IPTG诱导后成功表达出54.2ku的MO融合蛋白,为该酶进一步的功能研究和开发奠定了基础。
- 辛晓妮闫志勇杨丽吴瑶王斌宋旭霞罗玮
- 关键词：嗜麦芽寡养单胞菌单加氧酶克隆原核表达
- D2蛋白酶双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立被引量：2
- 2010年
- 目的：建立一种定量测定D2蛋白酶的双抗体夹心ELISA方法。方法：用棋盘滴定法确定捕获抗体、检测抗体的最佳工作浓度;绘制标准曲线,确定线性范围、检测限和定量限;检测该方法的准确性（回收率）、精密性和特异性,并与Bradford法检测结果进行比较。结果：包被抗体和捕获抗体的最佳包被效价分别为1∶4 000和1∶5 000;检测的线性范围为（28~1 180）μg/L,检测限为4.6μg/L。经方法学考核,批内、批间变异系数分别为5.64%和7.17%,回收率为92.44%~105.26%,与碱性蛋白酶、蛋白酶K等其他蛋白无交叉反应,与Bradford法检测结果具有良好的相关性。结论：该方法灵敏度高,重复性好,为后期D2蛋白酶规模发酵优化、分离纯化研究提供了定量检测的方法,并为后期药代动力学、临床研究提供了思路和备选方法。
- 苏洁王斌鲁晓晴赵巍闫志勇钱冬萌丁守怡宋旭霞杨丽
- 关键词：ELISA双抗体夹心法
- 体质量超标准和肥胖与痛风发病风险关系Meta分析被引量：9
- 2016年
- 目的探讨体质量超标准（超标）和肥胖与痛风发病风险之间的关系。方法检索PubMed、Web of Science、万方、维普以及中国知网数据库,收集从建库至2015年9月所有有关超标和肥胖与痛风发病风险关系的中英文文献。采用随机效应模型来计算合并相对危险度（RR）以及95%可信区间（CI）。结果共有9篇文献包含249 739例研究对象符合超标的纳入标准,11篇文献包含382 548例研究对象符合Ⅰ级肥胖的纳入标准,3篇文献包含68 946例研究对象符合Ⅱ或Ⅲ级肥胖的纳入标准。超标、Ⅰ级肥胖和Ⅱ或Ⅲ级肥胖的合并RR分别为1.52（95%CI=1.35~1.72）、2.12（95%CI=1.81~2.48）和2.60（95%CI=1.93~3.50）。结论超标和肥胖与痛风的发病风险增加有关。
- 杨丽姜文洁张东峰
- 关键词：超重肥胖症痛风META分析
- D2蛋白酶间接ELISA检测方法的建立
- 2010年
- 目的建立D2蛋白酶间接ELISA检测方法,为D2蛋白酶的进一步研究及应用奠定基础。方法以纯化的D2蛋白酶为抗原,免疫新西兰白兔,制备D2蛋白酶多克隆抗体,建立D2蛋白酶间接ELISA检测方法,并进行验证及初步应用。结果D2蛋白酶间接ELISA检测方法的最佳反应条件为:一抗稀释度为1∶64000,二抗稀释度为1∶80000,抗原稀释度为1∶100,饱和包被浓度为1160ng/ml,封闭剂为10%胎牛血清。标准曲线的线性检测范围为18～1160ng/ml。该方法准确性、重复性良好,特异性强、敏感性高,与琼脂扩散试验检测结果的符合率为95.5%。结论已建立了D2蛋白酶间接ELISA检测方法,可用于D2蛋白酶含量的检测。
- 苏洁王斌鲁晓晴赵巍闫志勇钱冬萌丁守怡宋旭霞杨丽刘海燕
- 关键词：间接ELISA多克隆抗体
- PCR和血清学检测在儿童EB病毒感染诊断中的意义被引量：31
- 2017年
- 目的探讨PCR与血清学检测在儿童EB病毒(EBV)感染性疾病诊断中的意义。方法选取2015年1月-2016年1月疑似EB病毒感染的住院患儿245例,根据年龄分为婴儿组、幼儿组、学龄前组和学龄组,采用化学发光免疫分析法进行血清VCA IgM、EA IgG及NA IgG的检测,同时采用实时荧光定量PCR法检测全血和血浆中EBV-DNA载量,并根据检测结果将患儿分为原发感染组、再激活组和既往感染组,比较不同年龄和不同感染组间EBV血清学和PCR法检测阳性率的差异。结果血浆EBV-DNA阳性率和拷贝数均明显低于全血(P=0.00);在原发感染组和再激活组,全血DNA阳性率均高于血浆DNA和血清学阳性率(P=0.00);按年龄组分类,血清学阳性率在婴儿组低于其他年龄组(χ2=12.38,P=0.00);在婴儿组、幼儿组和学龄前组,全血DNA阳性率均高于血清学(P<0.05),在学龄组,两者差异无统计学意义。结论 PCR与血清学检测EBV感染的阳性率和意义不同,应尽量采用两种方法结合来检测儿童EBV感染。
- 牟文凤杨丽于华徐莉莉王亚秋
- 关键词：EB病毒血清学实时荧光定量PCR儿童
- 一株蛋白酶高产菌株的筛选及糖类碳源对产酶影响的初步研究
- 目的:从海洋生物双齿围沙蚕消化道筛选高产蛋白酶菌株,初步研究其蛋白酶性质,及不同糖类碳源对其产蛋白酶的影响。方法:用脱脂奶粉平板溶圈法及改良Lowry法进行产蛋白酶株的筛选,对菌株进行16S rDNA系统发育分析和系统鉴...
- 杨丽闫志勇代玉梅宋旭霞王斌
- 文献传递
- 嗜麦芽寡养单胞菌D2株荧光素样单加氧酶基因的原核表达
- 构建嗜麦芽寡养单胞菌D2株荧光素样单加氧酶基因表达克隆,并进行融合表达。PCR扩增D2菌株基因组DNA中包含单加氧酶基因的约1300bp的核酸片段,并克隆到pMD18中测序,分析发现该基因片段中含有一个996bp的完整开...
- 闫志勇辛晓妮杨丽吴瑶王斌宋旭霞罗玮
- 嗜麦芽寡养单胞菌SMP蛋白的胞外可调控分泌及序列分析被引量：1
- 2016年
- 为了观察和探讨嗜麦芽寡养单胞菌SMP蛋白胞外可调控分泌现象及其机制,将收集到的环境株菌D2株及9株临床株在含不同成分的培养基中培养,取培养液上清利用SDS-PAGE电泳观察SMP蛋白分泌情况;提取各菌株基因组DNA,PCR扩增其smp基因并进行克隆和序列测定;将获得的SMP氨基酸序列用Blastp、Megalign等进行分析,并构建系统发育树。结果显示,不同来源的嗜麦芽寡养单胞菌胞SMP蛋白分泌均存在可调控现象,酵母提取物可抑制该蛋白的分泌,而适宜浓度的麦芽糖则具有促进作用。序列对比及系统发育树分析显示,SMP的氨基酸序列具有种属的特异性,且临床株和环境株中存在一定的差异,临床株中该蛋白的氨基酸序列高度保守,而环境株则序列差异相对明显的,但不同来源的菌株SMP均含有保守的信号肽;提示该蛋白可能与其致病性相关,其胞外分泌的可调控机制值得进一步深入探究。
- 郭双双毕春霞杨丽刘兴雨秦江楠朱元祺王斌闫志勇
- 关键词：嗜麦芽寡养单胞菌蛋白分泌
- 嗜麦芽寡养单胞菌D2株基因组文库的构建及部分克隆的分析被引量：5
- 2010年
- 目的自双齿围沙蚕消化道内分离出的嗜麦芽寡养单胞菌D2株经前期研究发现其具有明显胞外分泌可溶性纤溶酶、蛋白酶等活性。文中构建嗜麦芽寡养单胞菌D2株基因组文库,了解其基因背景。方法用Sau3AⅠ酶切D2株基因组DNA,回收0.2~2kb的DNA片段,连接至pMD18-T质粒载体,转化大肠杆菌JM109,在含有Amp的LB平板上筛选重组子,酶切鉴定后建库保存;随机挑取15个酶切鉴定正确的阳性克隆测序,在网络数据库中进行BLASTX分析。结果共得到转化子约1124个,符合建库要求;经测序证实获得了D2株碱性磷酸酶、AMP-依赖性合成酶、荧光素样单加氧酶等蛋白的结构基因序列。结论成功构建了嗜麦芽寡养单胞菌D2株的基因组文库,为进一步了解该菌的背景及筛选其功能基因奠定基础。
- 杨丽闫志勇王斌辛晓妮宋旭霞赵巍钱冬萌苏洁
- 关键词：嗜麦芽寡养单胞菌基因组文库克隆
- HCMV IE86对ARPE-19细胞周期的影响
- 2009年
- 目的:构建真核表达质粒pEGFP-N3-IE2,瞬时转染ARPE-19细胞,探讨其对视网膜色素上皮细胞周期的影响。方法:采用PCR方法从质粒pIEP86AD169扩增出IE2片段,将其定向克隆于pEGFP-N3,构建真核表达质粒pEGFP-N3-IE2,酶切、测序鉴定,脂质体介导瞬时转染ARPE-19细胞,RT-PCR、免疫荧光法分析IE2基因在mRNA和蛋白水平的表达,流式细胞仪检测转染前后细胞周期的变化。结果:成功构建重组质粒pEGFP-N3-IE2,并在被转染细胞中检测到IE2基因的表达;瞬时转染后细胞周期表现为S期细胞比例显著增高。结论:成功构建pEGFP-N3-IE2真核表达质粒,重组质粒能在ARPE-19细胞中顺利表达IE2,IE2基因可以引起ARPE-19细胞的细胞周期S期阻滞。
- 刘海燕李玲白志强王斌钱冬萌丁守怡宋旭霞赵巍闫志勇苏洁杨丽
- 关键词：HCMVARPE-19细胞周期
