孙健
- 作品数：4 被引量：20H指数：3
- 供职机构：中国科学院大连化学物理研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- 固定化克鲁维酵母Y-179外切菊粉酶的研究
- 2010年
- 鹰嘴豆孢克鲁维酵母(Kluveromyces cicerisporus Y-179)分泌的糖基化菊粉外切酶经高碘酸钠氧化其分子表面的糖链产生醛基,再共价结合于氨基型固定化载体ZH-HA上,固定化酶活力达到4 000 U/g湿载体。所制备的固定化酶在pH 3.5和70℃温度下表现出最大反应活性,该固定化酶pH稳定性和热稳定性较游离酶明显提高。固定化酶在分批式反应器中重复水解菊粉50批次,活力没有明显损失,表现出良好的工作稳定性。
- 陈玮孙健杜宇光李曙光潘建义袁中一赵辅昆
- 关键词：菊粉菊粉酶固定化
- 粪产碱杆菌青霉素G酰化酶在大肠杆菌中组成型表达及分离纯化被引量：13
- 2004年
- 将粪产碱杆菌青霉素G酰化酶基因构建重组表达质粒pKKFPGA ,pKKFPGA再转化宿主菌DH5α,所得重组菌不需诱导便能高效表达青霉素G酰化酶 ,表达量达 2 5 90u L ,比野生型粪产碱杆菌表达量高 4 32倍 ,其菌体比活力达 30 0 (u L) A6 0 0 。菌体破碎后的上清液经DEAE_SepharoseCL 6B离子交换层析和Butyl_SepharoseCL 4B疏水层析 ,即可得纯度提高 2 0倍、比活为 6 8 6u mg的青霉素G酰化酶 ,两步纯化的总收率达 91%。Western印迹分析表明 5 %的原前体青霉素酰化酶在胞内形成了包涵体 。
- 杨志建蔡谨孙健袁中一
- 关键词：青霉素G酰化酶粪产碱杆菌纯化包涵体大肠杆菌
- 巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶在新型环氧载体ZH-HA上的固定化被引量：3
- 2008年
- 巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶共价结合在新型环氧-氨基型载体ZH-HA上,通过对酶浓度、固定化时间、pH以及缓冲液浓度等条件的考察,确定了最优固定化条件:50 mg比活力6000U/g的巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶蛋白和1g ZH-HA悬浮于pH9.0 1 mol/L磷酸缓冲液,室温搅拌6 h,制得固定化巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶,活力2126 U/g湿载体,活力回收率7.67%。比较研究了固定化酶与原酶性质,原酶最适温度45℃,最适pH为8.0。固定化酶则分别是50℃和9.0,分别比溶液酶偏移5℃、1.0个pH单位。经过40批连续水解青霉素G钾盐,固定化巨大芽孢杆菌青霉素酰化酶仍保持80%的活力,显示出良好的工作稳定性。
- 孙健周毅频陶家权袁中一许国旺
- 关键词：固定化巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶
- 粪产碱杆菌青霉素G酰化酶的分离提取被引量：4
- 2006年
- 比较研究了几种破碎大肠杆菌细胞的方法,如渗透压法、超声波法、玻珠震碎法、玻珠研磨法、有机溶剂法、冻融法以及盐酸胍/EDTA法等,以确定出一种简单、快速、高效的破碎重组大肠杆菌细胞的方法获得粪产碱杆菌青霉素G酰化酶(AfPGA)用于后续试验。结果表明玻珠震碎法、超声波法和渗透压法是较优的细胞破碎方法,活力回收率分别为99.7%、78.4%、60.7%,其他方法均低于22%。而比活力以渗透压法为最高,达到4.40 U/mg。
- 孙健杨志建许国旺袁中一
- 关键词：大肠杆菌细胞破碎比活力
